ГОСТ Р ИСО 20395-2023. Национальный стандарт Российской Федерации. Биотехнология. Требования к оценке эффективности методов количественного определения последовательностей нуклеиновых кислот-мишеней. Количественная ПЦР и цифровая ПЦР

1 Область применения

 

Настоящий стандарт устанавливает общие требования к оценке эффективности и обеспечению качества методов определения последовательностей нуклеиновых кислот (мишеней).

Настоящий стандарт применим к количественному определению последовательностей ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) мишеней, используя методы амплификации либо цифровой ПЦР (цПЦР), либо количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР). Он применяется к последовательностям-мишеням, присутствующим в молекулах нуклеиновых кислот, включая двухцепочечную ДНК (дцДНК), такую как геномная ДНК (гДНК) и плазмидная ДНК, одноцепочечную ДНК (оцДНК), комплементарную ДНК (кДНК) и одноцепочечную РНК (оцРНК), включая рибосомальную РНК (рРНК), матричную РНК (мРНК) и длинную и короткую некодирующую РНК [микроРНК (миРНК) и короткую интерферирующую РНК (киРНК)], а также двухцепочечную РНК (дцРНК).

Настоящий стандарт применим к нуклеиновым кислотам, полученным из биологических источников, таких как вирусы, прокариотические и эукариотические клетки, бесклеточные биологические жидкости (например, плазма или клетки) или лабораторных источников [например, олигонуклеотиды, синтетические генетические конструкции и транскрибированная in vitro (IVT) РНК].

Настоящий стандарт не применим к количественному определению очень коротких ДНК олигонуклеотидов (< 50 оснований).

Настоящий стандарт включает:

- аналитический план, включая методы количественного определения (количественное определение числа копий нуклеиновой кислоты с использованием калибровочной кривой, как в кПЦР, или посредством подсчета молекул, как в цПЦР, количественный анализ относительно независимой пробы и пропорциональные измерения), и использование контрольных проб;

- количественную оценку общей массовой концентрации нуклеиновой кислоты и контроль качества пробы нуклеиновой кислоты, включая оценку качества нуклеиновой кислоты (чистота и целостность);

- метод ПЦР-анализа, оптимизацию, испытание на специфичность с помощью компьютерного моделирования и в лабораторных условиях;

- контроль и анализ качества данных, включая критерии приемки, установку пороговых значений и нормализацию;

- валидацию метода (прецизионность, линейность, предел количественного определения, предел обнаружения, правильность и устойчивость) по определенным требованиям для кПЦР и цПЦР;

- подходы к установлению метрологической прослеживаемости и оценке неопределенности измерений.

Настоящий стандарт не устанавливает критерии или требования к отбору проб биологического материала или обработке биологических проб (т.е. сбор, сохранность, транспортирование, хранение, обработка и экстракция нуклеиновой кислоты). Также он не устанавливает требования и критерии отбора проб для специфических областей применения (например, продукты питания или клиническое применение, где могут возникать определенные проблемы с матрицей).