ГОСТ Р ИСО 20395-2023. Национальный стандарт Российской Федерации. Биотехнология. Требования к оценке эффективности методов количественного определения последовательностей нуклеиновых кислот-мишеней. Количественная ПЦР и цифровая ПЦР

Введение

 

Настоящий стандарт разработан для подтверждения аналитических требований в отношении количественного определения специфических последовательностей (мишеней) нуклеиновых кислот. Он также может быть применим для расширенного биопроизводства, биологических исследований и разработок, промышленной биотехнологии, инженерной биологии и передовой терапии, где необходимо продемонстрировать качество продукции, основываясь на измерениях и количественном определении специфических последовательностей-мишеней нуклеиновых кислот.

Количественное определение последовательностей-мишеней нуклеиновых кислот - это сквозное функциональное измерение, которое оказывает широкое воздействие на многие аспекты биотехнологии. Например, количественное определение биомаркеров нуклеиновых кислот с целью мониторинга эффективности биопроцессов и их соответствия качеству по расчетным параметрам для биофарматического производства и промышленной биотехнологии, характеристика чистоты и качества клеточных лекарственных препаратов для передовой терапии (ATMPs); оценка числа копий гена для оценивания активности и терапевтической эффективности генной терапии и аналитики контроля процессов для применения при редактировании генома и инженерной биологии.

Основополагающий метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) изменил сферу анализа нуклеиновых кислот благодаря ее надежности и простоте. Научно-техническое развитие оборудования оказало воздействие на широкий спектр методов/приборов для количественного определения нуклеиновых кислот, основанных на ПЦР, и привело к последующему развитию таких методов, как:

- количественная ПЦР в реальном времени (кПЦР), предлагающая методы количественной оценки молекул ДНК и РНК относительно калибровочного материала или независимой пробы;

- цифровая ПЦР (цПЦР), предлагающая возможность выполнения количественного определения, отслеживаемого до СИ, посредством метода молекулярного подсчета, без необходимости построения калибровочной кривой.

Однако, проведение количественного определения нуклеиновых кислот на высоком уровне аналитического качества может быть проблематичным. Например, широко известно, что загрязненные или разложенные экстракты нуклеиновой кислоты могут повлиять на точность количественной оценки. Так же, плохо проработанный анализ кПЦР или цПЦР с низкой производительностью амплификации и специфичностью праймера может повлиять на точность количественной оценки. Кроме того, такие аспекты, как калибровочные растворы, градуировочные кривые, корректировка данных и обработка, могут оказать сильное влияние на точность количественной оценки последовательностей-мишеней нуклеиновых кислот.

Настоящий стандарт позволит улучшить достоверность получаемых данных, будет способствовать выбору и оптимизации процедур и обеспечит поддержку рабочих параметров, которые можно использовать при проведении количественного определения последовательностей-мишеней нуклеиновых кислот. Данные отраслей биотехнологии и биологической науки с высокой достоверностью измерений обеспечат взаимосогласованность данных, улучшенное качество продукции, сниженные риски и затраты и будут способствовать международной торговле.

В настоящем стандарте использованы следующие формулировки:

- "должен" указывает на требование;

- "следует" - на рекомендацию;

- "возможно" - на разрешение;

- "может" - на возможность или способность.

Более подробные данные приведены в Директивах ИСО/МЭК, часть 2.