ГОСТ Р ИСО 23162-2023. Национальный стандарт Российской Федерации. Исследование качества спермы базовое. Требования и методы исследований
7 Обработка результатов и протокол результатов исследований
7.1 Общие положения
Результаты исследований включают подсчет сперматозоидов и обработку результатов.
В каждой лаборатории необходимо определить неопределенность измерения в соответствии с ISO/TS 20914.
7.2 Расчеты и представление результатов
7.2.1 Общее количество сперматозоидов в эякуляте
Концентрацию сперматозоидов в эякуляте сложно интерпретировать правильно, поскольку конечный объем эякулята зависит от функционирования эндокринных желез, регуляция которых время от времени может изменяться у одного и того же пациента, а также между эякулятами разных пациентов. Поэтому следует также вычислить объем эякулята:
- общее количество сперматозоидов равно объему эякулята, умноженному на концентрацию сперматозоидов.
7.2.2 Другие расчеты
a) Подвижность
Подвижность сперматозоидов вычисляют на основе среднего значения двух проведенных повторных исследований и представляют в виде процентов (исходя из количества подсчитанных сперматозоидов используют только целые значения):
- быстрая поступательная подвижность сперматозоидов;
- медленная поступательная подвижность сперматозоидов;
- непоступательная подвижность сперматозоидов;
- отсутствие подвижности.
Помимо указанных данных могут быть вычислены и представлены в виде процентов (результат представляют как целое число) следующие результаты исследований:
- процент сперматозоидов, обладающих поступательной подвижностью (двигающихся по прямой) (быстрая + медленная поступательная подвижность сперматозоидов);
- процент подвижных сперматозоидов (быстрая + медленная поступательная подвижность сперматозоидов + непоступательная подвижность сперматозоидов).
Примечание - Оценка подвижности по четырем категориям, включая различие между быстрой и медленной поступательной подвижностью сперматозоидов, дает важную информацию для принятия клинических решений [1].
b) Морфология
Основываясь на количестве подсчитанных сперматозоидов (где результат представляют как целое число) и индексе тератозооспермии (TZI) (где результат представляют с точностью до двух десятичных знаков), проводят морфологию сперматозоидов:
- процент "идеальных" сперматозоидов [15];
- процент зарегистрированных аномалий (головка, шейка/средняя часть, хвост или цитоплазматический остаток) от всех оцененных сперматозоидов (т.е. не только их распространенность среди аномальных сперматозоидов);
- конкретные аномалии [например, сперматозоиды с округлой головкой (т.е. глобозооспермия), сперматозоиды с грушевидной формой головки, свободные головки сперматозоидов] необходимо указывать отдельно для каждой аномалии, если их количество более чем 20 на 100 сперматозоидов;
- индекс TZI, являющийся необязательным; его вычисляют как общее количество видимых дефектных областей [головка, шейка (средняя часть), хвост и цитоплазматический остаток], деленное на количество аномальных сперматозоидов, в которых они были подсчитаны (указанные результаты представляют с точностью до двух десятичных знаков).
7.3 Представление результатов
7.3.1 Общие положения
Результаты исследований представляют в виде процентов (целое число).
В случае применимости индекса TZI результат всегда указывают с точностью до двух десятичных знаков.
Концентрация и количество сперматозоидов: результат представляют как целые значения для результатов не менее 10 млн; для значений от 0,05 до 9,95 млн результат представляют с точностью до одного десятичного знака для наглядности в целях интерпретации результатов. Для более низких значений, например до 0,05 млн, результат представляют в тысячах вместо миллионов, чтобы уточнить приблизительный характер полученного числа (например, 40 тыс. вместо 0,04 млн).
7.3.2 Содержание протокола исследования спермы
Помимо требований, указанных в ИСО 15189, должны быть включены следующие данные, относящиеся к исследованию эякулята:
- продолжительность полового воздержания, дни;
- информация о том, был ли эякулят собран в лаборатории или в другом месте и доставлен в лабораторию. В последнем случае время доставки в лабораторию также должно быть зафиксировано в протоколе исследования;
- вязкость, разжижение и другие макроскопические наблюдения;
- объем эякулята, мл;
- концентрация сперматозоидов, млн/мл;
- общее количество сперматозоидов в миллионах на эякулят;
- для эякулятов без сперматозоидов во влажном препарате (10 мкл) в протокол исследования включают информацию о любых наблюдаемых сперматозоидах в осадке после центрифугирования эякулята;
- процент подвижности;
- проценты морфологии и TZI (если проводился расчет);
- процент живых сперматозоидов, если он вычислен;
- pH при измерении;
- другие существенные или необычные результаты, обнаруженные при микроскопическом исследовании влажного препарата, например агрегаты и агглютинаты, наличие круглых клеток, дебриса и кристаллов.
Примечание 1 - Дифференциация между различными типами круглых клеток в эякуляте часто затруднена. Выявление лейкоцитов в эякуляте иногда может свидетельствовать о наличии воспалительного процесса в организме человека, а мазки, окрашенные по Папаниколау (или другим валидированным методом), могут выявлять в том числе присутствие незрелых зародышевых клеток (сперматиды, сперматоциты или, в редких случаях, сперматогонии), но четкое различие между ними часто невозможно. Однако в руководстве ВОЗ рекомендуется включать в протокол исследования более 1 млн пероксидазоположительных клеток на миллилитр (ВОЗ, 2010 г.) [16];
- наблюдения за необычными физическими характеристиками эякулята, например цветом, запахом, вязкостью (см. 6.3.1 и 6.3.2).
Примечание 1 - Ответственность за интерпретацию и консультирование по протоколу исследования спермы возлагают на клиницистов, направивших пациента на исследование.
7.4 Практические аспекты обеспечения качества
7.4.1 Внутренний контроль качества
В лаборатории должен быть внедрен внутренний контроль качества (ВКК) для выявления аспектов несоответствующей лабораторной деятельности, происходящих из-за дефекта используемых реагентов, оборудования, расходных материалов, а также из-за неправильного применения стандартных операционных процедур или ненадлежащего обучения специалистов.
Контрольные материалы для исследования подвижности сперматозоидов (изображения видеопоследовательностей) и фиксированные окрашенные предметные стекла для исследования морфологии и жизнеспособности сперматозоидов, соответственно, могут быть изготовлены лабораторией и сохранены для повторного использования или получены при участии в межлабораторных сличениях.
Предварительно разбавленные и фиксированные образцы спермы не стабильны, а следовательно, необходимо валидировать методы подготовки контрольных материалов для их применения в течение длительного времени для мониторинга качества исследования концентрации сперматозоидов. Кроме того, можно использовать альтернативные методы для проверки точности подсчета сперматозоидов с применением таких контрольных материалов, как латексные сферы. Контрольные материалы в форме изображений видеопоследовательностей подвижных сперматозоидов не могут оценить все аспекты подвижности сперматозоидов, однако их использование необходимо для оценки компетентности каждого специалиста в наиболее значимой части исследования подвижности, а именно в определении разных классов подвижности сперматозоидов.
7.4.2 Внутрилабораторные сличения
Один и тот же образец спермы должен быть исследован в лаборатории для подтверждения сходимости результатов между специалистами, осуществляющими данные исследования. Указанные исследования должны проводиться периодически для подтверждения сходимости результатов с использованием одного и того же контрольного материала.
Концентрация сперматозоидов. После разведения свежей спермы фиксирующим растворителем фактический подсчет сперматозоидов не должен зависеть от времени (в пределах временного интервала от нескольких часов до нескольких дней в зависимости от герметичности емкости для разведения и прилипания сперматозоидов к ее стенкам). Основной проблемой является общее увеличение агрегации сперматозоидов, что снижает концентрацию свободных сперматозоидов.
Подвижность сперматозоидов. Достоверную оценку сравнения получить сложно из-за изменений подвижности сперматозоидов в эякуляте. Изображения видеопоследовательностей подвижности сперматозоидов являются методическим материалом для индивидуальной оценки подвижности сперматозоидов. Для достоверности контроля качества с помощью изображений видеопоследовательностей важно, чтобы наблюдаемые видеофрагменты представлялись специалисту таким же образом, как при обычном исследовании эякулята. Поэтому рекомендуется визуальная оценка с использованием тех же изображений видеопоследовательности или просмотра влажного препарата на экране компьютера, что и для проведения контроля качества.
Примечание - В настоящем стандарте не рассматривают оценку подвижности с помощью компьютерного анализа спермы.
Морфология сперматозоидов. Оценка индивидуальной изменчивости может быть выполнена с фиксированными, окрашенными и подготовленными мазками.
Жизнеспособность сперматозоидов. Оценка межиндивидуальной изменчивости может быть выполнена на окрашенных и подготовленных мазках.
Должен быть проведен анализ результатов, полученных разными специалистами, с целью установления временного интервала, в рамках которого результаты исследования считаются достоверными. В лаборатории необходимо определить частоту внутрилабораторных сличений с учетом оценки риска для каждой характеристики спермы, а также тех целей, которые должны быть достигнуты для различных измеряемых параметров.
7.4.3 Межлабораторные сличения
Каждая лаборатория, выполняющая визуальное исследование спермы, также должна участвовать в межлабораторных сличениях, касающихся, по крайней мере, основных характеристик эякулята (концентрация сперматозоидов, подвижность, морфология и жизнеспособность), исследованных и зарегистрированных лабораторией.
Примечание - Программы межлабораторных сличений обеспечивают целевые значения результата исследования и не полагаются только на средние значения результатов участвующих лабораторий, специалисты которых обладают различным опытом и компетенциями.
Подписаться на обновления