ГОСТ Р ИСО 11737-2-2022. Национальный стандарт Российской Федерации. Стерилизация медицинской продукции. Микробиологические методы. Часть 2. Исследования на стерильность, выполняемые при определении, валидации и техническом обслуживании процесса стерилизации

Приложение A

(справочное)

 

РУКОВОДСТВО ПО ИССЛЕДОВАНИЯМ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ ПРИ ВАЛИДАЦИИ

И ТЕХНИЧЕСКОМ ОБСЛУЖИВАНИИ ПРОЦЕССА СТЕРИЛИЗАЦИИ

 

A.1 Область применения

В настоящем приложении приведены руководящие указания по выполнению требований, установленных в настоящем стандарте. Данное руководство не является исчерпывающим, но должно подчеркнуть важные аспекты, которым следует уделить внимание.

Допустимо использовать методы, отличные от приведенных в настоящем приложении, но такие альтернативные методы следует продемонстрировать как эффективные для достижения соответствия требованиям настоящего стандарта.

Настоящее приложение не предназначено в качестве контрольного перечня для оценки соответствия требованиям настоящего стандарта.

A.1.1 Указания отсутствуют.

A.1.2 Исследования на стерильность (например, исследования на стерильность для выпуска партии/серии) (см. 3.12) исключены из настоящего стандарта, поскольку они не проводятся при определении, валидации и техническом обслуживании процесса стерилизации. Исследования на стерильность не подходят для подтверждения эффективности процесса стерилизации, уровня стерильности или атрибутов, связанных со стерильностью продукта, таких как целостность упаковки или срок годности продукта. См. также [24].

A.2 Руководство по нормативным ссылкам

В настоящем стандарте нормативные ссылки отсутствуют.

В частности, следует отметить, что настоящий стандарт не является обязательным требованием для создания полноценной системы менеджмента качества. Однако существуют элементы системы менеджмента качества, которые применимы для контроля исследований на стерильность, используемых для валидации и технического обслуживания процесса стерилизации медицинских изделий. Обращают внимание на стандарты системы менеджмента качества на всех стадиях производства или переработки медицинских изделий (см. ИСО 13485) и лабораторных систем менеджмента качества (см. ИСО/МЭК 17025). Национальные и/или региональные правила предоставления медицинских изделий могут потребовать внедрения полной системы менеджмента качества и оценки этой системы третьей стороной.

A.3 Руководство по терминам и определениям

Указания отсутствуют.

A.4 Общие положения

A.4.1 Указания отсутствуют.

A.4.2 Указания отсутствуют.

A.5 Выбор продукта

A.5.1 Общие положения

A.5.1.1 Продукт выбирают из партии продуктов, произведенных в условиях, которые являются репрезентативными для стандартного производства. Если размер партии продукта позволяет, то предпочтительно выбирать продукт для исследования случайным образом.

Методы отбора и обработки образцов продукта выбирают и выполняют таким образом, чтобы избежать непреднамеренной контаминации и изменения количества и типов микроорганизмов на/в образце.

Образцы для исследований допускается отбирать из изделий, отбракованных в процессе производства, при условии, что они были подвергнуты той же обработке и тем же условиям, что и приемлемые изделия, и что причина отбраковки не ставит под угрозу достоверность исследования.

A.5.1.2 Требования, относящиеся к группировке продуктов, обычно приведены в конкретном международном стандарте для разработки, валидации и рутинного контроля процесса стерилизации (см., например, ИСО 11135 и ИСО 11137-2).

A.5.1.3 Указания отсутствуют.

A.5.2 Руководство для ЧПИ

A.5.2.1 Когда это осуществимо, для исследования на стерильность следует использовать весь продукт, хотя это может оказаться невозможным, если продукт не получается поместить в доступные лабораторные испытательные сосуды. В таких ситуациях допускается использовать часть продукта (например, ЧПИ), выбранную для проведения исследования. Если продукт или ЧПИ не может быть исследован в доступных лабораторных емкостях, его разделяют на две или более емкости и эти емкости оценивают вместе, как одну; если одна емкость дает положительный результат, весь продукт считают положительным.

Если на элементе продукта имеется маркировка, подтверждающая стерильность только канала прохождения жидкости, то следует рассматривать канал прохождения жидкости как весь продукт (т.е. ЧПИ = 1).

A.5.2.2 Для ЧПИ следует использовать как можно часть продукта. Микробная биологическая нагрузка на ЧПИ должна представлять микробиологическую проблему, возникающую в процессе стерилизации. Если продукт комплексный, то ЧПИ представляет собой уровень биологической нагрузки различных элементов продукта. Следует учитывать аспекты производства, которые способствуют распространению микроорганизмов на продукте.

Такие изделия, как простыни, отрезки трубок и т.д., являются типами продуктов, от которых можно ожидать равномерного распределения уровня биологической нагрузки. Это допускается не учитывать в случае применения ручных способов для резки или складывания простыней, а также для резки, транспортирования и сборки трубок.

A.5.2.3 Примерами ЧПИ, которые выбирают из изделий с более серьезными проблемами для процесса стерилизации, являются наборы трубок с соединениями, запорными клапанами и т.д.

Примеры продуктов, для которых используют различные базы расчета ЧПИ, приведены в таблице A.1.

 

Таблица A.1

 

Примеры выбора ЧПИ

 

База для ЧПИ	Наименование продукта
Площадь поверхности	Имплантаты (не рассасывающиеся)
	Простыни (пластиковые)
	Трубки (переменный диаметр)
	Рулоны бинта
Масса	Бумага
	Порошки
	Халаты
	Имплантаты (рассасывающиеся)
	Рулоны бинта
Длина	Трубки (постоянный диаметр)
	Рулоны бинта
Объем	Жидкость в контейнере

 

A.5.2.4 Указания отсутствуют.

A.5.3 Упаковка для продукта и ЧПИ

Важно, чтобы продукт подвергался воздействию стерилизующего агента в его первоначальной форме и упаковке. Чтобы свести к минимуму и/или облегчить манипуляции при исследованиях на стерильность и таким образом уменьшить вероятность получения ложноположительных результатов, возникающих в результате контаминации при манипуляциях, не связанных с продуктом или производственным процессом, продукт рекомендуется разобрать и переупаковать перед началом стерилизации.

Следует учитывать влияние разборки и переупаковки продукта на реакцию микроорганизмов к стерилизующему агенту, например анаэробной среды к аэробной среде.

Также важно учитывать влияние разборки и переупаковки продукта на доступ стерилизующего агента к микроорганизмам. Например, разборка может позволить получить доступ к стерилизующему агенту, который не является репрезентативным для обычной обработки.

Если ЧПИ собирают и упаковывают до воздействия стерилизующего агента, то следует проводить эти процедуры в условиях, выбранных для минимизации изменений биологической нагрузки.

A.6 Методы проведения исследований на стерильность

A.6.1 Как указано в разделе 6, метод проведения исследований на стерильность твердого изделия может быть разделен на две общие категории:

a) прямое погружение продукта: прямое погружение является предпочтительным методом проведения исследований на стерильность медицинской продукции. При прямом погружении продукт или ЧПИ асептически помещают в контейнер (или несколько контейнеров, см. A.5.2.1) с питательной средой и затем инкубируют. Следует использовать достаточное количество питательной среды для достижения контакта между питательной средой и целым продуктом или ЧПИ. Кроме того, следует рассмотреть следующие вопросы:

- необходимость разборки перед воздействием стерилизующего агента (см. также A.5.3),

- разборку и/или манипуляцию перед погружением в питательную среду,

- перемешивание после помещения в питательную среду,

- добавление поверхностно-активного вещества (которое не оказывает ингибирующего действия, например, микробостатического или микробоцидного) в питательную среду для улучшения увлажнения поверхности продукта.

Контакт между питательной средой и продуктом или ЧПИ следует поддерживать в течение всего инкубационного периода. Если это невозможно из-за плавучести продукта, следует внедрить процедуру периодического манипулирования контейнером, чтобы облегчить контакт в течение инкубационного периода.

Для проведения исследования на стерильность канала прохождения жидкости продукта канал прохождения жидкости заполняют питательной средой, и продукт инкубируется. Способ промывки или промывки канала прохождения жидкости см. в b);

b) извлечение микроорганизмов из продукта: когда невозможно использовать прямое погружение из-за характеристик медицинской продукции, таких как размер или бактериостатическая/фунгистатическая активность, может потребоваться перенос микроорганизмов.

Следует соблюдать осторожность при использовании этого метода, т.к. элюирование микроорганизмов из изделия часто не так эффективно для исследования на стерильность по сравнению с прямым погружением. Поэтому, когда это практически осуществимо, предпочтительны методы прямого погружения. Если метод прямого погружения невозможен, можно рассмотреть метод элюирования. В методах элюирования решающее значение имеет эффективность восстановления в сочетании с оценкой риска и обоснованием.

Процедуры, при которых микроорганизмы извлекаются из продукта путем физической обработки перед переносом в условия культивирования в питательную среду, в свою очередь, могут быть дополнительно подразделены на:

- элюирование и мембранную фильтрацию;

- элюирование и культивирование элюата.

В обоих случаях первоначальным действием является извлечение микроорганизмов из продукта или ЧПИ. Используемые методы такие же, что и при определении уровня биологической нагрузки, и описаны в ИСО 11737-1:2018, B.2.2. Аналогично - решения по выбору подходящего элюента те же, что и для определения уровня биологической нагрузки, и описаны в ИСО 11737-1:2018, B.2.3 и таблице B.1.

После того как микроорганизмы были извлечены из продукта или ЧПИ, исследование на стерильность допустимо выполнять с использованием мембранной фильтрации или культивирования всего элюата (см. A.6.4)

A.6.2 Как правило, достаточно провести исследование на стерильность продукта после его извлечения из упаковочной системы и исключить упаковочную систему из исследования. При необходимости проверить упаковку; т.к. она является неотъемлемой частью продукта, следует отметить, что многие упаковочные материалы плавают на поверхности питательной среды. Это не допускает контакта с питательной средой и большей частью исследуемого упаковочного материала. В этом случае следует попытаться установить лучший контакт между питательной средой и упаковочным материалом [см. A.6.1a)].

A.6.3 Условия асептической методики, применяемой при проведении исследований на стерильность, включают следующее:

- проведение исследования в вытяжном шкафу с ламинарным потоком воздуха, шкафу микробиологической безопасности или другом оборудовании, обеспечивающем одинаковый уровень твердых частиц и микробиологический уровень, в помещении с микробиологическим контролем или в барьерной изоляции в среде с микробиологическим контролем [см. ИСО 14644-7, ИСО 14698 (все части) и ЕН 12469];

Пример - Вытяжка ламинарного потока воздуха или шкаф биобезопасности, расположенный в специальном, экологически контролируемом помещении; барьерная изоляция.

- стерилизация всего оборудования, материалов и изделий, используемых в испытании;

- асептическое внесение в испытательную зону испытательной посуды, изделий и питательных сред;

- дезинфекция внешней поверхности упаковки перед внесением испытуемых изделий в испытательную зону;

- дезинфекция поверхностей в испытательной зоне;

- сведение к минимуму манипуляций, необходимых для выполнения испытания;

- минимизация количества материалов в вытяжном шкафу;

- забота о том, чтобы не нарушить структуру воздушного потока во время манипуляций;

- обучение выполнению асептических методик.

A.6.4 Для проведения исследований на стерильность путем проведения элюирования продукта с последующим культивированием элюата один из методов заключается в использовании питательной среды в качестве элюента и, после элюирования, в переносе элюата в стерильные контейнеры и последующей инкубации.

Другой метод заключается в использовании элюента, который не поддерживает рост микроорганизмов, и после элюирования элюат смешивают с равным объемом питательной среды двойной концентрации в стерильных контейнерах и инкубируют. В качестве альтернативы, если объем элюата составляет не более 10% от объема питательной среды, элюат допускается смешивать с обычной концентрированной питательной средой в стерильных контейнерах и инкубировать.

A.6.5 Для проведения исследований на стерильность с помощью фильтрации элюат с помощью вакуума или давления пропускают через стерильный мембранный фильтр с номинальным размером пор не более 0,45 мкм.

Поверхности, контактировавшие с элюатом, можно промыть моющим/промывочным раствором (например, жидкостью D), далее стерильным элюентом или раствором, содержащим нейтрализатор (см. A.6.6), который также пропускают через мембранный фильтр. После этого либо питательную среду асептически переносят в блок фильтрации, либо мембранный фильтр асептически переносят в питательную среду.

Обе эти операции завершаются инкубацией.

A.6.6 Исследуемый продукт следует подвергнуть скринингу, чтобы определить, не выделяются ли в среду какие-либо ингибирующие вещества, которые могут вызвать ложноотрицательный результат (см. A.7). Скрининг осуществляется путем инокуляции небольшого количества репрезентативных организмов в среду, содержащую продукт, и называется исследованием пригодности метода (или исследованием бактериостатичности/фунгистатичности).

При обнаружении микробоцидных или микробостатических веществ их влияние может быть сведено к минимуму путем:

a) добавления нейтрализатора(ов) в питательную среду или элюент;

b) удаления микробоцидного или микробостатического вещества из элюата путем фильтрации;

c) снижения концентрации микробоцидного или микробостатического вещества до неэффективного уровня путем разбавления.

Примечание - Это достигается путем увеличения объема питательной среды или элюента и, при необходимости, разделением продукта на несколько исследуемых контейнеров.

 

Микробоцидные или микробостатические вещества могут связываться с фильтрующими мембранами. Следует позаботиться о том, чтобы обеспечить использование подходящих фильтрующих мембран, дабы свести к минимуму вероятность связывания.

Руководство по процедурам, микроорганизмам, исследованию и времени инкубации для определения пригодности метода приведены в [31] - [34]. Однако температура инкубации и питательной среды должна быть такая же, как и та, которая будет использоваться при проведении исследований на стерильность.

Следует предпринять несколько попыток, используя различные условия культивирования, чтобы устранить или уменьшить ингибирующие вещества до такой степени, чтобы исключить неприемлемый риск. После многократных попыток, если ингибирующее вещество не устранено, целесообразно принять сокращение ингибирующих веществ с сопутствующим обоснованием и оценкой риска.

A.6.7 Соответствующий международный стандарт по разработке, валидации и рутинному контролю процесса стерилизации может рекомендовать размер выборки и определенные условия культивирования для использования в исследовании на стерильность.

Как правило, выбирают один тип питательной среды исходя из предположения, что он будет оптимальным для культивирования большинства аэробных и факультативных микроорганизмов, которые могли бы пережить воздействие стерилизующего агента. При использовании соево-казеиновой питательной среды в качестве единой питательной среды обычно используют условия культивирования при температуре (30 +/- 2) °C в течение 14 дней. При использовании другой питательной среды для проведения исследований на стерильность следует учитывать соответствующие условия инкубации.

Температура инкубации, рекомендуемая для исследований на стерильность, может быть ниже рекомендуемой для определения уровня биологической нагрузки.

Выбор условий культивирования должен быть сделан, если:

- соответствующий международный стандарт по разработке, валидации и рутинному контролю процесса стерилизации не предусматривает использование питательной среды;

- использование одного набора условий культивирования нецелесообразно из-за типов микроорганизмов, которые могут присутствовать на продукте и преодолевать воздействие стерилизующего агента (например, присутствие анаэробов или микобактерий).

Факторы, которые следует учитывать при выборе условий культивирования в этих случаях, должны включать следующее:

- особенности продукта;

- способ изготовления;

- источники потенциальной микробиологической контаминации;

- типы микроорганизмов, с которыми можно столкнуться.

Информация о типах микроорганизмов, полученная в результате определения биологической нагрузки, выполненного в соответствии с ИСО 11737-1, может служить обоснованием выбора условий культивирования.

A.6.8 Интервал времени между воздействием стерилизующего агента и переносом в условия культивирования следует свести к минимуму, чтобы ускорить восстановление микроорганизмов. Необходимо приложить все усилия для проведения исследований на стерильность элементов продукции или ЧПИ и сделать это как можно быстрее после воздействия стерилизующего агента. Если задержка в переносе неизбежна, то условия, при которых хранятся элементы продукции, выбирают таким образом, чтобы предотвратить потерю жизнеспособности микроорганизмов или изменения микробной популяции.

A.6.9 Макроскопическое исследование обычно используют для изучения среды на рост после инкубации. Признаки роста могут включать мутность, пленку, осадок, флокуляцию и изменение цвета. Как правило, когда изделия положительно влияют на рост микроорганизмов, микроорганизм(ы) должен(ны) быть идентифицирован(ы).

Визуальный осмотр рекомендуется проводить с подсветкой, чтобы ускорить обнаружение мутности.

Мутность не всегда вызывается ростом микроорганизмов. Мутность из-за микробного роста проверяют с помощью:

a) микроскопического исследования;

b) переноса частей (каждая не менее 1 мл) мутной среды в неиспользованные контейнеры с той же средой и инкубации субкультурных контейнеров в течение не менее четырех дней;

c) субкультурирования мутной среды с использованием других общепринятых микробиологических методов (например, посев штрихом для выделения на твердые питательные среды).

A.7 Оценка метода проведения исследований на стерильность

При оценке метода проведения исследований на стерильность учитывают возможность неверных результатов из-за ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Появление ложноположительных результатов в исследованиях на стерильность может повлиять на интерпретацию данных, полученных при валидации, сделав обработку стерилизующим агентом менее эффективной. Если не доказано иное, положительные результаты должны рассматриваться как полученные из микроорганизмов, выживших при обработке стерилизующим агентом. Факторы, которые могут повлиять на возникновение ложноположительных результатов, включают:

- утечку в стерильном барьере;

- контаминацию во время исследований;

- контаминацию от обработки во время инкубации.

Появление ложноотрицательных результатов в исследованиях на стерильность может повлиять на интерпретацию данных, полученных при валидации, сделав обработку стерилизующим агентом более эффективной. Факторы, которые влияют на возникновение ложноотрицательных результатов, включают:

- неспособность условий культивирования поддерживать рост выживших микроорганизмов;

- наличие микробоцидных и/или микробостатичных веществ, выделяющихся из изделия во время исследования на стерильность (см. A.6.6);

- интервал времени между обработкой стерилизующим агентом и воздействием условий культивирования, позволяющих микроорганизмам потерять жизнеспособность (см. A.6.8).

Если возникновение положительных исследований на стерильность объясняют неправильным выполнением исследований на стерильность, проблемой, связанной со стерилизующим агентом, или другой соответствующей причиной, допустимо принять корректирующие меры и провести повторное исследование на стерильность.

A.8 Техническое обслуживание метода проведения исследований на стерильность

A.8.1 Поскольку исследование на стерильность крайне необходимо для поддержки определения, валидации и технического обслуживания процесса стерилизации, продукт или семейство продуктов, изменение продукта, процессов, используемых для производства продукта, процесса стерилизации или параметров исследования на стерильность, требуют рассмотрения необходимости демонстрации постоянной пригодности метода. Следует учитывать последствия кумулятивных изменений с течением времени. Изменения в исследовании на стерильность необходимо проводить в рамках документированного процесса контроля изменений.

Даже в отсутствие запланированных изменений в продукте, процессах, используемых для производства продукта, или в параметрах исследования на стерильность следует рассмотреть вопрос о периодическом пересмотре текущей пригодности метода, чтобы с течением времени не произошло накопления незначительных изменений, которые могли бы отрицательно повлиять на дальнейшую пригодность метода исследований.

A.8.2 См. A.8.1.