ГОСТ ISO 10993-11-2021. Межгосударственный стандарт. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследования общетоксического действия

6.2 Планирование исследования

 

6.2.1 Подготовка животных

Здоровые молодые половозрелые животные должны быть акклиматизированы к лабораторным условиям как минимум в течение 5 сут до исследования. Животные должны быть рандомизированы и распределены по экспериментальным группам.

6.2.2 Лабораторные животные

6.2.2.1 Выбор вида

Используют, как правило, грызунов (крыс, мышей). Характеристики модели (возраст, масса и т.д.) приведены в 4.2 и 4.3. Использование животных, не являющихся грызунами, должно быть обосновано.

6.2.2.2 Количество и пол животных

Количество и тип групп, число животных в группе и их пол приведены в 4.5. Рекомендуется использовать дополнительную группу животных с увеличенной дозой введения, наряду с дополнительными контрольными группами на заранее обозначенный период времени после эвтаназии основной группы. Данную дополнительную группу и ее контроль используют для изучения эффекта введения, включая восстановительный период, устойчивость к воздействию или замедленное проявление негативных признаков. Для субхронических исследований необходимо содержать дополнительную группу животных сроком не менее чем 28 сут.

6.2.2.3 Условия размещения и кормления

Температура и относительная влажность в помещениях для экспериментальных животных должны соответствовать их виду, например, температура (22 +/- 3) °C и влажность от 30% до 70% для крыс. Режим искусственного освещения, как правило, - 12 ч освещения и 12 ч темноты.

Для кормления животных допускается использовать стандартные коммерческие лабораторные корма, при этом следует обеспечить животным неограниченный доступ к питьевой воде. Животных следует размещать в клетках группами по полу или индивидуально с обоснованием необходимости. При групповом размещении допустимо помещать не более пяти животных в одну клетку.

6.2.3 Условия исследования

6.2.3.1 Уровни доз

Используемую дозу при исследовании токсичности МИ следует определять в соответствии с результатами оценки риска, уравновешивая дозу клинического введения с использованием факторов безопасности по применимости. Для более длительных исследований следует применять не менее трех уровней дозы и соответствующие контрольные группы животных. За исключением процедуры введения исследуемого образца обращение с животными контрольной группы должно быть идентично обращению с животными исследуемой группы.

В отличие от классических исследований общей токсичности химических веществ при многократном введении, в исследованиях при многократном воздействии с использованием МИ, как правило, не получают эффект доза-ответ, поэтому выявление токсического эффекта при наивысшем уровне дозы не требуется.

6.2.3.2 Процедура

Животным вводят дозу образца ежедневно в течение недели на весь период исследования. Для более длительных исследований многократного воздействия допускается вводить дозы в течение пяти суток в неделю, при этом данную информацию следует задокументировать с соответствующим обоснованием.

6.2.4 Масса тела

Массу тела животного измеряют непосредственно перед расчетом дозы, еженедельно после первой дозы, если это позволяет длительность исследования, и по окончании исследования.

6.2.5 Клинические наблюдения

Период наблюдения в исследовании общей токсичности при многократном воздействии доз должен соответствовать длительности исследования. Частота и тип наблюдений установлены в 4.10 и приложении C. Наблюдение следует проводить с достаточной частотой, при этом выполняют определенные действия, обеспечивающие минимальные потери среди исследуемых животных, например, вскрытие или заморозка животных, найденных мертвыми, и изоляция или эвтаназия слабых или болезненных животных. Визуальные наблюдения должны включать в себя следующие признаки, но не ограничиваться таковыми: изменения кожи и шерсти, глаз и слизистых оболочек, изменения в вегетативной и центральной нервных системах, дыхательной и кровеносной системах, в соматомоторной деятельности и в схемах поведения, которые идентифицируют в соответствии с приложением C.

Как правило, перед введением исследуемого образца и по окончании исследования необходимо провести офтальмологический осмотр с использованием офтальмоскопа или эквивалентного приемлемого оборудования, предпочтительно для всех животных, но как минимум, животных групп высокой дозы и контроля. При обнаружении изменений в глазах следует осмотреть всех животных. Решение не проводить осмотр должно быть задокументировано с соответствующим обоснованием.

6.2.6 Патология

6.2.6.1 Клиническая патология

Проводят следующие исследования:

a) гематологию, см. приложение D, проводят по окончании периода исследования. В зависимости от длительности исследования необходимо выполнять более частый забор образцов крови;

b) биохимическое исследование крови проводят по окончании периода исследования. В зависимости от длительности исследования необходимо выполнять более частый забор образцов. Объектами исследования являются электролитный баланс, метаболизм углеводов и функция печени и почек. Выбор конкретных объектов исследования зависит от наблюдений за характером действия образца. Список рекомендуемых анализов приведен в приложении D. При необходимости допускается дополнительно провести клиническое биохимическое исследование крови для продления наблюдения за отмеченными негативными признаками.

Анализ мочи (см. приложение D) на регулярной основе необязателен и его следует проводить только при показаниях, основанных на ожидаемой или наблюдаемой токсичности.

Полученные ранее нормальные значения пригодны для установления базовых уровней и для сравнения со значениями, полученными в контрольных группах животных. Если ранее полученные значения признаны неадекватными, то необходимо осуществить сбор соответствующей информации для животных того же возраста, пола, линии и источника, предпочтительно в той же лаборатории.

6.2.6.2 Патологоанатомические исследования

Всех животных подвергают полному общему вскрытию, включающему в себя осмотр внешних покровов тела, всех отверстий, а также черепной коробки, грудной и брюшной полостей и их содержимого. Надпочечники, мозг, эпидидимисы, сердце, почки, печень, яичники, селезенка, семенники, тимус и матка должны быть взвешены во влажном состоянии как можно скорее после вскрытия во избежание высыхания и получения ложно низких значений. Органы и ткани, перечисленные в приложении E, следует сохранять в приемлемой среде для будущего гистопатологического анализа.

6.2.6.3 Гистопатологические исследования:

a) проводят полную гистопатологию на органах и тканях животных контрольной группы и группы высокой дозы;

b) осматривают все макроскопические повреждения;

c) у животных в группах с низкой и средней дозами, если таковые использовались, проводят гистопатологическое исследование легких на наличие инфекции, так как это позволяет легко оценить состояние здоровья животных. Также, у данных животных проводят гистопатологические исследования печени и почек. Дальнейшее гистопатологическое исследование животных этих групп допускается не проводить. Гистопатологическое исследование проводят обязательно на животных группы высокой дозы, у которых выявлены органы с макроскопическими повреждениями;

d) при наличии дополнительной группы животных гистопатологию проводят на их тканях и органах, в которых выявлены проявившиеся ранее токсические эффекты;

e) в исследованиях хронической токсичности необходимо использовать животных-индикаторов для контроля возможного наличия инфекционных агентов. По показаниям допускается проводить серологические или гистологические исследования этих животных;

f) при выборе органов для гистопатологии следует учитывать химические характеристики МИ. Например, если МИ покрыто лекарствами/фармацевтическими агентами, то у животных, подвергавшихся их воздействию, необходимо исследовать органы - мишени этих химических веществ на предмет каких-либо неблагоприятных эффектов.