БИБЛИОТЕКА НОРМАТИВНЫХ ДОКУМЕНТОВ

ГОСТ Р ИСО 17822-2021. Национальный стандарт Российской Федерации. Наборы реагентов для диагностики in vitro. Процедуры исследования, основанные на амплификации нуклеиновых кислот, для обнаружения и идентификации патогенных микроорганизмов. Руководство по обеспечению качества лаборатории

4 Основные требования к лабораториям, использующим МАНК для определения патогенных микроорганизмов

 

4.1 Общие требования к управлению рисками и биобезопасности в лаборатории

В клинико-диагностической лаборатории должны быть обеспечены безопасность и защита персонала лаборатории и обслуживающего персонала. Применяют требования ИСО 15190. Так как многие микроорганизмы являются патогенными, должны применяться соответствующие требования правил биобезопасности.

В клинико-диагностической лаборатории должны оценивать процесс обнаружения нуклеиновых кислот для выявления таких рисков, как отказы, эксплуатационные ошибки, опасности и опасные ситуации. Риски для пациентов и сотрудников лаборатории должны быть определены до начала исследования и нивелированы в ходе планирования работ. До и во время внедрения, а также регулярно в течение всего жизненного цикла эксплуатации риски необходимо анализировать, контролировать и устранять.

Примечание 1 - При осуществлении деятельности в клинико-диагностической лаборатории можно руководствоваться [9].

Примечание 2 - Может применяться Руководство ВОЗ по биобезопасности [11].

Примечание 3 - Общие принципы и методы управления рисками, описанные в [8], также могут быть применены в клинико-диагностической лаборатории.

Примечание 4 - Общие рекомендации по уменьшению количества лабораторных ошибок приведены в [40].

Примечание 5 - Информация о планировании контроля качества на основе принципов управления рисками приведена в [1].

 

4.2 Общие требования к организации процедуры обнаружения патогенов в лаборатории

Должны соблюдаться общие требования к надлежащей практике по организации деятельности лабораторий, использующих МАНК, в которые обычно входит разделение помещений, проводится деятельность до и после амплификации, и, возможно, дальнейшее разделение лабораторных этапов. Наряду с соответствующей оценкой риска следует также учитывать внутрилабораторные, касающиеся изоляции патогенов.

Следует обратить внимание на ситуации, в которых риск загрязнения образца/проб больше, чем требуется для обработки экстрагированных нуклеиновых кислот. При работе с патогенами, для которых более высок риск распространения, как правило, требуется более низкий риск при обработке выделенной нуклеиновой кислоты и исследований МАНК. Однако не следует полагать, что процедура экстракции делает образец/пробу незаразной. В связи с этим следует рассмотреть вопрос об оценке риска возникновения угрозы безопасности.

Чтобы повысить биобезопасность, инактивация патогенов должна происходить на самой ранней стадии, на которой это возможно. Однако метод инактивации должен быть утвержден, и при необходимости должны быть применены процедуры, касающиеся рисков и безопасности.

Существуют общие требования к лабораториям по управлению и предотвращению контаминации.

Можно выделить пять категорий источников загрязнения; деятельность лаборатории должна быть организована таким образом, чтобы свести к минимуму риск контаминации от каждого потенциального источника.

1) Окружающая среда

Источник загрязнения - вне лаборатории. Как правило, не является проблемой при обнаружении патогенов, в случае, когда близкородственные виды патогенов окружающей среды могут вызывать риск контаминации, в лаборатории следует задействовать процессы для выполнения необходимых требований.

Более подробная информация об однонаправленном рабочем процессе и условиях давления воздуха приведена в 7.2.2.

2) Лаборатория

Основной источник контаминации обусловлен получением лабораторией большого количества нуклеиновых кислот. При использовании МАНК это наиболее частая проблема, поскольку функция лаборатории - воспроизводство больших количеств исследуемой мишени (ампликона); это основной источник любой контаминации при использовании МАНК. Контаминация в лаборатории также может возникать из-за использования векторов, содержащих целевые последовательности. При обнаружении патогенов контаминация также может быть производной микробной культуры исследуемых патогенов. Для предотвращения и уменьшения вероятности контаминации можно разделить подготовку проб и проведение исследования от помещений, где может присутствовать большое количество генетического материала. В дальнейшем риск загрязнения должен быть снижен путем использования специального лабораторного оборудования и халатов.

3) Реагенты

Поскольку многие реагенты МАНК рекомбинантны, они могут сохранять некоторое количество бактериальной ДНК. Данная проблема особенно актуальна при использовании ортогональных генов, таких как ген рибосомной РНК 16S.

4) Исследователь

Обычно не является основным источником загрязнения для специфичного к патогену МАНК и не является носителем патогена. Потенциально, может возникнуть проблема бессимптомного носителя патогена (или близкородственных ему видов) в организме человека. Стандартные лабораторные способы защиты (например, защитная одежда, перчатки, наконечники фильтров и т.д.) могут уменьшить риск контаминации.

5) Образец/проба

Потенциальный основной источник заражения, который часто не учитывают. Если образец/пробу с высоким уровнем патогенных микроорганизмов обрабатывают вблизи биологического материала с низким уровнем (титром) или не содержащего патоген, вероятна перекрестная контаминация. Стандартные лабораторные процедуры (например, применение наконечников фильтров) могут уменьшить риск загрязнения из этого источника.

Для снижения риска контаминации должны быть разработаны и внедрены стандартные процедуры, а персонал должен пройти соответствующее обучение, которые могут включать ограничение доступа персонала и однонаправленный рабочий процесс, который начинается от мест работы с отрицательным ампликоном к местам работы с положительными ампликонами и/или использование одноразовых лабораторных халатов или другой защитной одежды. Это может быть неприменимо при использовании закрытых систем, которые проводят экстракцию, амплификацию и детекцию нуклеиновых кислот автоматически как единый рабочий процесс.

В результате загрязнение должно контролироваться соответствующим образом, позволяющим определить его влияние на результаты. Персонал, имеющий доступ в лабораторию, должен быть обучен, а обучение задокументировано.

Дальнейшая информация представлена в разделе 5.

4.3 Оборудование (включая программное обеспечение)

Оборудование, предназначенное для проведения исследований на основе амплификации нуклеиновых кислот, включая программное обеспечение, необходимое для проведения анализа, должно устанавливаться, верифицироваться, калиброваться и обслуживаться в соответствии с инструкциями изготовителя по применению и документированными лабораторными процедурами.

При необходимости должна быть верифицирована интеграция лабораторных приборов в существующую ИТ-инфраструктуру.

Пример - Подключение к базам данных, биоинформационным функциям и т.д.

Если для одного и того же теста на наличие нуклеиновой кислоты потенциально используют несколько приборов, то для обеспечения сопоставимости результатов проводят сравнение на разных приборах. В лаборатории должны верифицировать любые разработанные внутренние интерфейсы, соединяющие компоненты приборов, а также верифицировать интерфейсы, соединяющие компоненты приборов, разработанные изготовителем.

4.4 Персонал лаборатории

Персонал, участвующий в проведении исследований на основе амплификации нуклеиновых кислот, должен быть квалифицирован и обучен до соответствующего уровня компетентности, необходимого для использования конкретного МАНК и работы с конкретным патогеном, включая постоянное повышение квалификации для поддержания компетентности.

Квалификация и прохождение обучения персоналом должны быть задокументированы.