ГОСТ Р ИСО 17822-2021. Национальный стандарт Российской Федерации. Наборы реагентов для диагностики in vitro. Процедуры исследования, основанные на амплификации нуклеиновых кислот, для обнаружения и идентификации патогенных микроорганизмов. Руководство по обеспечению качества лаборатории

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины и определения.

Терминологические базы данных ИСО и МЭК доступны по следующим интернет-адресам:

- Платформа онлайн-просмотра ИСО: доступна на http://www.iso.org/obp;

- Электропедия МЭК: доступна на http://www.electropedia.org/.

3.1 точность (accuracy): Степень близости результата испытаний или измерений к истинному значению.

Примечание 1 - На практике истинное значение заменяют принятым опорным значением.

Примечание 2 - При применении к набору результатов испытаний или измерений термин "точность" включает комбинацию случайных компонент и общей систематической ошибки или смещения.

Примечание 3 - Точность связана с комбинацией правильности и прецизионности измерений.

[ИСО 3534-2:2006]

3.2 продукт амплификации, ампликон (amplification product, amplicon): Специфический фрагмент ДНК (см. 3.17), образованный в процессе использования технологии амплификации ДНК, такой как полимеразная цепная реакция (ПЦР) (см. 3.34).

[ИСО 13495:2013, 3.3.1]

3.3 аналитическая специфичность; специфичность (analytical specificity, specificity): Способность измерительной системы, применяющей заданную методику измерения, выдавать измерения только одного или нескольких мезюрандов (см. 3.28), не зависящих ни друг от друга, ни от любой другой величины в системе, подвергаемой измерению.

Примечание 1 - Отсутствие аналитической специфичности называют аналитической интерференцией.

[ИСО 18113-1:2009, A.3.2 [21]]

Примечание 2 - Специфичность процедуры измерения не следует путать с клинической специфичностью.

[ИСО 18113-1:2009, A.3.2 [21]]

Примечание 3 - VIM (международный словарь по метрологии); JCGM 200; 2012 [22] использует термин "селективность" для этого понятия вместо "специфичность".

Примечание 4 - Для качественных и полуколичественных процедур исследования аналитическая специфичность определяется способностью получать отрицательные результаты, соответствующие отрицательным результатам, полученным эталонным методом.

[ИСО 18113-1:2009, A.3.4]

3.4 биориск (biorisk): Вероятность или возможность того, что произойдет определенное неблагоприятное событие (в контексте настоящего стандарта: случайное заражение или несанкционированный доступ, потеря, кража, неправильное использование, утечка или преднамеренное выделение), которое может привести к причинению вреда.

[Управление биорисками ВОЗ, Руководство по биолабораторной безопасности, сентябрь 2006]

3.5 биобезопасность (biosafety): Включает в себя принципы профилактики, технологии и методы, которые применяют для предотвращения непреднамеренного воздействия патогенов и токсинов или их случайной утечки.

[Управление биорисками ВОЗ, Руководство по биолабораторной безопасности, сентябрь 2006]

3.6 биозащита (biosecurity): Комплекс профилактических мероприятий и действий по снижению риска преднамеренной или непреднамеренной передачи инфекционных заболеваний.

Примечание 1 - Биозащита включает в себя предотвращение преднамеренного изъятия (кражи) биологических материалов из лабораторий.

Примечание 2 - Данные профилактические меры представляют собой сочетание систем и методов, применяемых в лабораториях для предотвращения злонамеренного использования опасных патогенов и токсинов и их распространения.

3.7 калибровка (calibration): Операция, в ходе которой при заданных условиях на первом этапе устанавливают соотношение между значениями величин с неопределенностями измерений, которые обеспечивают эталоны, и соответствующими показаниями с присущими им неопределенностями, а на втором этапе на основе этой информации устанавливают соотношение, позволяющее получать результат измерения исходя из показания.

Примечание 1 - В соответствии со Сводом Федеральных Постановлений США калибровка - это процесс тестирования и настройки прибора или испытательной системы для установления корреляции между реакцией измерения и концентрацией или количеством вещества, которое измеряется с помощью процедуры тестирования (см. 42CFR 493.1218, с изменениями) [20].

[VIM; JCGM 200; 2012]

3.8 сертифицированный стандартный образец; ССО (certified reference material; CRM): Стандартный образец (см. 3.41), одно или несколько определенных свойств которого установлены метрологически обоснованной процедурой, сопровождаемый сертификатом СО (см. 3.41), в котором приведено значение этого свойства, связанная с ним неопределенность и утверждение о метрологической прослеживаемости.

Примечание 1 - Понятие "значение" включает также номинальное свойство или такой качественный признак, как идентичность или последовательность. Неопределенности для таких признаков могут быть выражены как вероятности или доверительный интервал.

Примечание 2 - Метрологически обоснованные процедуры производства и сертификации СО (см. 3.41) описаны, в частности, в ИСО 17034 [17].

Примечание 3 - Руководство ИСО/МЭК 99:2007 [19] имеет аналогичное определение.

[Руководство ИСО 30, 2.1.2]

3.9 клиническая эффективность (clinical performance): <Лабораторная медицина> способность диагностического исследования обеспечить получение результатов, связанных с конкретным клиническим или физиологическим состоянием в целевой группе населения и для предполагаемого пользователя.

Примечание 1 - Иногда упоминается как диагностическая эффективность или клиническая обоснованность; клиническая эффективность - это гармонизированный термин, одобренный Глобальной целевой группой по гармонизации (GHTF) и ее преемником, Международным форумом по регулированию медицинского оборудования (IMDRF).

Примечание 2 - Оценка клинической эффективности часто основывается на результатах других типов клинических исследований для определения истинно положительных или истинно отрицательных результатов.

[GHTF SG5/N 6:2012, 4.4.2, с изменениями - термин "медицинское изделие" заменен на "диагностическое исследование", а термин "особенный" заменен на "конкретный"]

3.10 клиническая чувствительность; диагностическая чувствительность (clinical sensitivity; diagnostic sensitivity): <Лабораторная медицина> способность методики IVD идентифицировать присутствие целевого маркера, сочетающегося с конкретной болезнью или состоянием.

Примечание 1 - Целевой маркер определяют как процент положительных результатов в пробах (см. 3.44), где целевой маркер должен присутствовать.

Примечание 2 - Диагностическую чувствительность также выражают как процент (числовая доля, умноженная на 100), рассчитанный путем умножения числа истинно положительных (ИП) значений на 100 и деления на сумму истинно положительных (ИП) и ложноотрицательных (ЛО) значений или 100·ИП/(ИП + ЛО). Данный расчет основан на такой организации исследования, при которой у каждого субъекта исследования берут только одну пробу (см. 3.44).

Примечание 3 - Целевое состояние определяют на основе критерия, независимого от рассматриваемой методики исследования.

[ИСО 18113-1:2009, A.3.15]

3.11 клиническая специфичность; диагностическая специфичность (clinical specificity; diagnostic specificity): <Лабораторная медицина> способность методики диагностического исследования in vitro выявлять отсутствие целевого маркера, ассоциированного с конкретной болезнью или состоянием.

Примечание 1 - Также определяют как процент отрицательных значений в пробах (см. 3.44), где целевой маркер, как известно, отсутствует.

Примечание 2 - Диагностическую специфичность также выражают как процент (числовая доля, умноженная на 100), рассчитанный путем умножения числа истинно отрицательных (ИО) значений на 100 и деления на сумму истинно отрицательных (ИО) и ложноположительных (ЛП) значений или 100·ИО/(ИО + ЛП). Данный расчет основан на такой организации исследования, при которой у каждого субъекта исследования берут только одну пробу (см. 3.44).

[ИСО 18113-1:2009, A.3.16]

3.12 комплементарная ДНК; кДНК (complementary DNA; cDNA): Одноцепочечная ДНК (см. 3.17), комплементарная исходной молекуле РНК (см. 3.42), синтезированная в присутствии обратной транскриптазы и служащая в качестве матрицы (см. 3.47) для синтеза ДНК-копий (см. 3.17).

3.13 контаминация (contamination): Введение/внесение/попадание нежелательного вещества или материи/субстанции.

3.14 пограничное значение (точка отсечения) (cut-off value): Значение величины, используемое как предельное для идентификации пробы/образцов (см. 3.44), указывающее на наличие или отсутствие определенной болезни, состояния или мезюранда (см. 3.28).

Примечание 1 - Точка отсечения определяет, какие результаты измерения признают положительными, а какие рассматривают как отрицательные.

Примечание 2 - Результаты измерения возле пограничного значения могут рассматривать как нерешающие.

Примечание 3 - Выбор пограничного значения определяет диагностическую специфичность (см. 3.11) и диагностическую чувствительность (см. 3.10) исследования.

3.15 денатурация (denaturation): Физическое и/или химическое воздействие, приводящее к разделению двойных спиралей нуклеиновых кислот.

Примечание 1 - Денатурация ДНК (см. 3.17) приводит к разделению двухцепочечной ДНК (см. 3.17) на одноцепочечную ДНК (см. 3.17).

[ИСО 21572:2013, 3.1.6, с изменениями - термин "денатурация белков" изменен на "денатурация", а слова "белки, представляющие интерес, или" были удалены. К данному пункту было добавлено примечание 1]

3.16 дезоксирибонуклеозидтрифосфат; дНТФ (deoxyribonucleoside triphosphate; dNTP): Раствор, содержащий дезоксиаденозин-трифосфат (дАТФ), дезоксицитидин-трифосфат (дЦТФ), дезоксигуанозин-трифосфат (дГТФ), дезокситимидин-трифосфат (дТТФ) и/или дезоксиуридин-трифосфат (дУТФ).

[ИСО 22174:2005, 3.3.7]

3.17 ДНК; дезоксирибонуклеиновая кислота (DNA; deoxyribonucleic acid): Полимер дезоксирибонуклеотидов, существующий в двухцепочечной (дцДНК) или одноцепочечной (оцДНК) форме.

[ИСО 22174:2005, 3.1.2]

3.18 ДНК-полимераза для ПЦР (DNA polymerase for PCR): Термостабильный фермент, катализирующий циклический синтез ДНК (см. 3.17).

[ИСО 22174:2005, 3.4.17]

3.19 секвенирование ДНК (DNA sequencing): Определение порядка нуклеотидных оснований (аденина, гуанина, цитозина и тимина) в молекуле ДНК (см. 3.17).

Примечание 1 - Последовательность, как правило, описывается с 5'-конца.

3.20 гибридизация (hybridization): Специфичное связывание комплементарных последовательностей нуклеиновых кислот (см. 3.32) при соответствующих условиях реакции.

[ИСО 22174:2005, 3.6.3]

3.21 ингибирование (inhibition): Сокращение процесса амплификации или интерференция в процессе обнаружения, которые могут привести к ложноотрицательным результатам или уменьшению количества продукта реакции.

3.22 интерферирущие вещества (interfering substances): Эндогенные или экзогенные вещества в биологическом материале клинических проб (см. 3.44), которые могут изменить результат исследования.

[ИСО 20186:2019-1, 3.15 с изменениями]

3.23 тесты, разработанные лабораторией; LDT (in house assay; laboratory developed test; LDT): Тип диагностического исследования in vitro, который разработан, изготовлен и используется в рамках одной лаборатории.

Примечание 1 - LDT должен перед началом использования пройти валидацию для его предполагаемого использования.

3.24 линейность (linearity): Способность метода анализа в определенном диапазоне выдать аналитический сигнал или результаты, пропорциональные количеству целевой последовательности нуклеиновых кислот (см. 3.46), определяемой в клинической пробе (см. 3.44).

Примечание 1 - Для кПЦР количественный цикл (также называемый значением порогового цикла или точкой пересечения) обратно пропорционален количеству целевой последовательности нуклеиновой кислоты (см. 3.46).

Примечание 2 - Термин "линейность" часто взаимосвязан с диапазоном линейности метода и относится к способности метода выдавать ответ или результат, который непосредственно связан с концентрацией целевой последовательности нуклеиновой кислоты (см. 3.46).

[ИСО 16577:2016, 3.92, с изменениями - добавлены примечания 1 и 2 к данному пункту; "количество аналита" заменено на "количество целевой последовательности нуклеиновой кислоты" (см. 3.46)]

3.25 предел обнаружения; LOD (limit of detection; LOD): Измеренное значение величины, полученное в соответствии с данной методикой измерений, для которого вероятность ошибочного утверждения об отсутствии компонента в материале равна , а вероятность ошибочного утверждения о его наличии равна .

Примечание 1 - Термин "аналитическая чувствительность" иногда используется для обозначения предела обнаружения, но такое использование в настоящее время не рекомендуется. См. ИСО 18113-1:2009, A.2.7 и A.2.8 для получения дополнительной информации.

Примечание 2 - При идентификации нуклеиновых кислот минимальное количество или присутствие целевого организма в заданном количестве определенного вещества, которое может быть достоверно обнаружено в условиях, заданных в применяемом методе.

Примечание 3 - В молекулярных методах и количественных молекулярных методах самая низкая концентрация мезюранда, которая может быть стабильно обнаружена (как правило, в > 95% проб (см. 3.44), исследованных в обычных клинических лабораторных условиях и в определенном типе пробы (см. 3.44).

Примечание 4 - При количественном исследовании значение предела обнаружения концентрации должно воспроизводимо отличаться от значений, полученных в пробах (3.44), которые не содержат мезюранд.

[ИСО 18113-1:2009, A.3.14, с изменениями - добавлены новые примечания]

3.26 предел количественного определения; LOQ (limit of quantification; LOQ): Наименьшая концентрация или количество целевой последовательности нуклеиновых кислот (см. 3.46) в определенном объеме, которая(ое) может быть измерена(о) с обоснованной статистической достоверностью последовательно в условиях, определенных методикой проведения исследования.

Примечание 1 - Обычно обозначается в терминах признака или измеренного (истинного) значения, с заданным коэффициентом вариации (КВ).

[ИСО 16577:2016, 3.91, с изменениями - заменены слова "содержание аналита, представляющего интерес" на "количество целевой последовательности нуклеиновых кислот (см. 3.46)", слова "количество матрикса" на "объем", а слова "относительное стандартное отклонение (ОСО)" на "коэффициент вариации (КВ)"]

3.27 мастермикс (mastermix): Смесь реагентов, необходимых для амплификации нуклеиновой кислоты, за исключением целевой ДНК (см. 3.17) и контрольных образцов.

[ИСО 22174:2005, 3.4.18]

3.28 измеряемая величина; мезюранд (measurand): Величина, подлежащая измерению.

[VIM; JCGM 200; 2012]

Пример 1 - Количество целевого гена, измеренное методом ПЦР (см. 3.34), зависит от размера ампликона (см. 3.2) при исследовании ПЦР (см. 3.34) и размера фрагмента матрицы (см. 3.47) (~< размер ампликона).

Пример 2 - Денатурация (см. 3.15) ДНК (см. 3.17) пробы (см. 3.44) до одноцепочечной ДНК влияет на количественную оценку методом dPCR (цифровой ПЦР), поскольку две цепи рассматриваются отдельно.

Примечание 1 - Инструкции по измерению требуют знания рода величины, включая любой соответствующий компонент, и связанных с ним химических соединений.

Примечание 2 - Во втором издании VIM и в МЭК 60050-300:2001 измеряемая величина определяется как "конкретная величина, подлежащая измерению".

Примечание 3 - Измерение, включая измерительную систему и условия, при которых оно проводится, может изменить явление, тело или вещество таким образом, что величина в процессе измерения будет отличаться от мезюранда определенным образом. В этом случае необходимо вводить соответствующую корректировку.

[Руководство ИСО/МЭК 99:2007, 2.23, с изменениями - изменены примечание 3 и примеры, примечание 4 исключено]

3.29 отрицательный контроль ПЦР (negative PCR control): Реакция, выполненная с водой [без целевой матрицы (см. 3.47)], не содержащей нуклеиновых кислот и каких-либо ингибиторов ПЦР.

[ИСО 22174:2005, 3.5.6]

3.30 отрицательный контроль процесса (negative process control): Образец (см. 3.44), не содержащий исследуемого возбудителя, прошедший все этапы аналитического процесса.

Примечание 1 - Исследование нуклеиновых кислот обычно включает подготовку пробы (см. 3.44), обогащение, выделение нуклеиновой кислоты (см. 3.32) и амплификацию мишени.

[ИСО 22174:2005, 3.5.2, с изменениями - изменено примечание 1 к данному пункту]

3.31 отрицательный контроль, не содержащий образца (контроль без матрицы); NTC (no template control; NTC): Контрольный тест, содержащий все реагенты, за исключением экстрагированного тестируемого образца (см. 3.44), матрицы (см. 3.47), нуклеиновых кислот (см. 3.32).

Примечание 1 - Этот тип контроля используют для демонстрации отсутствия загрязняющих нуклеиновых кислот (см. 3.32). Вместо матрицы (см. 3.47) ДНК (см. 3.17), например, в реакцию добавляют соответствующий объем воды, свободной от нуклеиновых кислот. Иногда используют термин "контроль реагентов ПЦР" (см. 3.34).

[ИСО 20395:2019, 3.20]

3.32 нуклеиновая кислота (nucleic acid): Макромолекула, являющаяся носителем генетической информации, или выступающая в качестве посредника при передаче информации.

Примечание 1 - Существуют два типа нуклеиновых кислот - ДНК (см. 3.17) и РНК (см. 3.42).

[ИСО 22174:2005, 3.1.1]

3.33 экстракция нуклеиновой кислоты (nucleic acid extraction): Выделение нуклеиновой кислоты (см. 3.32) из биологического материала.

Примечание 1 - Как правило, проводится перед амплификацией и анализом нуклеиновой кислоты (см. 3.32).

3.34 полимеразная цепная реакция; ПЦР (polymerase chain reaction; PCR): Ферментативная реакция, позволяющая амплифицировать ДНК (см. 3.17).

[ИСО 22174:2005, 3.4.1].

3.35 полиномиальная регрессия (polynomial regression): Форма регрессии, использующая метод наименьших квадратов с применением полиномов различных степеней:

Y = a + b1X (полином первой степени или линейное приближение);

Y = a + b1X + b2X2 (полином второй степени) и

Y = a + b1X + b2X2 + b3X3 (полином третьей степени).

3.36 ДНК ПЦР-качества (PCR-quality DNA): Матрица (см. 3.47) ДНК (см. 3.17) достаточной длины, чистоты и количества для выполнения ПЦР (см. 3.34).

[ИСО 24276:2006, 3.2.3]

3.37 исследование, одобренное регулирующим органом <*> (regulatory body approved assay): Исследования, которые разработаны и внедрены изготовителем и одобрены регулирующим органом для диагностических целей.

--------------------------------

<*> В Российской Федерации для диагностики IVD применяют только зарегистрированные медицинские изделия (МИ). Регистрацию МИ проводят в установленном порядке организации, уполномоченные федеральным органом исполнительной власти.

Пример - Тесты с маркировкой СЕ.

Примечание 1 - Маркировка СЕ - заявление производителя о том, что продукт соответствует требованиям релевантных директив Евросоюза.

3.38 обратная транскрипция; ОТ (reverse transcription; RT): Способ получения ДНК (см. 3.17) из матрицы (см. 3.47) РНК (см. 3.42) с использованием ферментативной активности обратной транскриптазы, связанной с одним или несколькими олигонуклеотидными праймерами при подходящих условиях.

[ИСО 16577:2016, 3.180]

3.39 модифицированный метод исследования in vitro (modified IVD labeled assays; modified IVD labeled tests): Методики, разработанные и внедренные изготовителями и одобренные регулирующим органом или отвечающие требованиям релевантных директив ЕС, но измененные при использовании в лабораториях.

Примечание 1 - В зависимости от степени изменений, внесенных в исходный метод, необходима повторная валидация этого метода.

3.40 ПЦР в реальном времени (real time PCR): Методика, сочетающая ПЦР (см. 3.34) и обнаружение меченого флуоресцентным зондом продукта амплификации в одной реакции.

3.41 стандартный образец; СО (reference material; RM): Материал, достаточно однородный и стабильный по отношению к одному или нескольким определенным свойствам, которые были установлены для того, чтобы использовать его по назначению в измерительном процессе.

Примечание 1 - "Стандартный образец" - это собирательный термин.

Примечание 2 - Свойства могут быть количественными или качественными, например отличительные характеристики веществ или соединений.

Примечание 3 - Применение может включать калибровку (см. 3.7) измерительной системы, оценку процедуры измерения, определение значений параметров других материалов и контроль качества.

Примечание 4 - В Руководстве ИСО/МЭК 99:2007 [19] приведено аналогичное определение (см. 5.13), но оно ограничивает сферу применения термина "измерение" количественными характеристиками. Однако в примечании 3 Руководства ИСО/МЭК 99:2007, 5.13 (VIM; JCGM 200; 2012 [22]) отдельно рассматриваются качественные свойства, называемые "номинальными свойствами".

[Руководство ИСО 30]

3.42 РНК; рибонуклеиновая кислота (RNA; ribonucleic acid): Полимер рибонуклеотидов, существующий в двухцепочечной или одноцепочечной форме.

[ИСО 22174:2005, 3.1.3]

3.43 устойчивость (robustness): Способность количественного анализа протекать в оптимальном режиме, вне зависимости от незначительного изменения его условий.

Примечание 1 - Обычно относится к ПЦР (см. 3.34), в которой амплификация происходит вне зависимости от незначительных изменений условий реакции, таких как концентрация ДНК (см. 3.17).

3.44 образец/проба <*> (sample): Одна или несколько представительных частей, взятых из системы и предназначенных для получения информации о целом.

--------------------------------

<*> В Российской Федерации для характеристики биологических жидкостей используют термин "первичная проба (проба)", для характеристики биологических тканей используют термин "образец (часть образца)". В данном стандарте термин "образец" применяют к ДНК и РНК. Под пробой понимается только гомогенный материал, полученный клинической лабораторией для исследования.

[ИСО 16577:2016, 3.185]

3.45 база данных последовательностей (sequence database): <Биоинформатика> биологическая база данных, состоящая из последовательностей нуклеиновых кислот (см. 3.32), белковых последовательностей или других полимерных последовательностей и сопутствующей аннотации.

Примечание 1 - Аннотация может относиться к организму, видам, функциям, мутациям, связанным с конкретными заболеваниями, функциональным или структурным признакам, библиографическим ссылкам и т.д.

Примечание 2 - Последовательности генома могут находиться в открытом доступе, так как любая последовательность ДНК (см. 3.17) или РНК (см. 3.42), или белка должна быть помещена в общедоступную базу данных.

3.46 целевая последовательность; целевая последовательность нуклеиновых кислот (target sequence; nucleic acid target sequence): Специфическая последовательность ДНК (см. 3.17), которую необходимо обнаружить, например, методом ПЦР (см. 3.34).

[ИСО 16577:2016, 3.203]

3.47 матрица (template): Участок ДНК (см. 3.17) или РНК (см. 3.42), который определяет нуклеотидную последовательность вновь синтезированной цепи ДНК (см. 3.17) или РНК (см. 3.42), причем эти две цепи комплементарны.

[ИСО 16577:2016, 3.206]

3.48 однонаправленный рабочий процесс (unidirectional work; flow forward work flow): <Лабораторная медицина> принцип обращения с первичной пробой (см. 3.44), предусматривающий физическое разделение принятого биологического материала и проходящей различные этапы первичной пробы (см. 3.44) и пробы в процессе обработки, включая амплифицированную ДНК (см. 3.17), во время процедуры анализа.

[ИСО 24276:2006, 3.3.5, с изменениями - слова "Лабораторная проба (см. 3.44) - первичная и в процессе обработки его часть, подвергающаяся исследованию" заменены на "первичная проба (см. 3.44) и проба в процессе обработки (см. 3.44)", а слова "всей процедуры" заменены на "процедуры анализа"]

3.49 валидация (validation): Подтверждение, путем предоставления объективных доказательств, соответствия требованиям предназначенного применения или использования.

Примечание 1 - Термин "валидированный" используется для обозначения соответствующего статуса.

Примечание 2 - Адаптировано из ИСО 9000:2015 [31].

Примечание 3 - Дополнительную информацию см. в приложении B.

[ИСО 15189:2012, 3.26]

3.50 верификация (verification): Подтверждение, посредством представления объективных свидетельств, того, что установленные требования были выполнены.

Примечание 1 - Термин "верифицированный" используется для обозначения соответствующего статуса.

Примечание 2 - Подтверждение может выражаться в таких действиях, как выполнение альтернативных расчетов, сравнение нового технического задания с аналогичным проверенным техническим заданием, проведение испытаний и демонстраций, а также рассмотрение документов перед началом использования.

Примечание 3 - Дополнительную информацию см. в приложении B.

[ИСО 9000:2015]