ГОСТ ISO 21149-2020. Межгосударственный стандарт. Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Подсчет и обнаружение мезофильных аэробных бактерий

13.3 Пригодность методов подсчета

13.3.1 Принцип выполнения

Для каждого штамма смешивают нейтрализованную пробу (исходную суспензию или разведение пробы в зависимости от антимикробной активности или растворимости продукции) с разведением культуры микроорганизма. Высевают на чашку Петри или фильтруют через мембранный фильтр. После инкубирования проверяют морфологию колоний и сравнивают полученное количество колоний с количеством колоний на контрольном посеве (без пробы).

Если количество микроорганизмов составляет менее 50% (0,3 log) от количества на контрольном посеве, модифицируют методику (используя другие разбавители, нейтрализаторы или комбинацию того и другого (см. приложение D)). Необходимо принимать во внимание вариабельность, свойственную для чашечного метода подсчета. Два результата должны рассматриваться как различающиеся, если расхождение превышает 50% или 0,3 - если выражены логарифмически. При отсутствии роста инокулята результаты испытаний признаются недействительными, если только контаминация продукции данным видом микроорганизмов не является маловероятной.

13.3.2 Тест на пригодность метода глубинного посева

Смешивают 9 см³ исходной суспензии и/или разведения(й) пробы в нейтрализирующем разбавителе (или в другом (см. 5.2)) с 1 см³ суспензии микроорганизмов концентрацией от 1 000 до 3 000 КОЕ/см³. Переносят 1 см³ в чашку Петри (предпочтительно в две чашки) и заливают от 15 до 20 см³ расплавленной агаризованной среды (см. 5.4.2), выдержанной на водяной бане при температуре, не превышающей 48 °C. Параллельно приготавливают и делают контрольный посев, используя тот же самый разбавитель и ту же самую суспензию микроорганизмов, но без пробы.

После инкубации в течение 24 - 72 ч при температуре (32,5 +/- 2,5) °C подсчитывают колонии на чашках и сравнивают результаты, полученные при испытании и на контрольном посеве. Разбавитель и метод подсчета считают удовлетворяющими требованиям при разведении 1 : 10 (когда используется 1 см³ исходной суспензии), если количество микроорганизмов, подсчитанных в тесте на пригодность, составляет не менее 50% от количества микроорганизмов на контрольном посеве.

13.3.3 Тест на пригодность метода поверхностного посева

Смешивают 9 см³ исходной суспензии в нейтрализирующем разбавителе (или в другом (см. 5.1)) с 1 см³ суспензии микроорганизмов концентрацией от 10 000 до 30 000 КОЕ/см³ (или менее, если распределяется 0,5 или 1 см³). Распределяют не менее 0,1 см³ суспензии по поверхности твердой агаризованной среды (см. 5.4.2) (предпочтительно в двух чашках). Параллельно приготавливают и делают контрольный посев, используя тот же самый разбавитель и ту же самую суспензию микроорганизмов, но без пробы.

После инкубации в течение 24 - 72 ч при температуре (32,5 +/- 2,5) °C подсчитывают колонии на чашках и сравнивают результаты, полученные при испытании и на контрольном посеве. Разбавитель и метод подсчета считают удовлетворяющими требованиям при разведении 1 : 10 (когда используется 1 см³ исходной суспензии), если количество микроорганизмов, подсчитанных в тесте на пригодность, составляет не менее 50% от количества микроорганизмов на контрольном посеве.

13.3.4 Тест на пригодность метода мембранной фильтрации

Смешивают соответствующее количество исходной суспензии пробы или разведения пробы, использованного в испытании (см. 9.3.2.3), и соответствующее количество стандартной суспензии микроорганизмов, количество клеток в которой соответствует приблизительно 100 КОЕ.

Фильтруют сразу же весь объем и промывают мембранный фильтр, используя необходимые объемы воды (см. 5.1), разбавителя (см. 5.2.3) или нейтрализатора (см. 5.2.2). Переносят мембранный фильтр на поверхность соответствующей агаризованной среды (см. 5.4.2).

Параллельно готовят контрольный посев при условиях, описанных выше, но без пробы продукции. Фильтрование и промывание в случае контрольного посева проводят в аналогичных условиях.

После инкубации в течение 24 - 72 ч при температуре (32,5 +/- 2,5) °C подсчитывают колонии на мембранных фильтрах и сравнивают результаты, полученные при испытании и на контрольном посеве. Метод мембранной фильтрации и разбавитель считают удовлетворяющими требованиям, если количество микроорганизмов, подсчитанных в тесте на пригодность, составляет не менее 50% от количества микроорганизмов на контрольном посеве.