ГОСТ Р 59326-2021. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочное сырье. Определение наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств методом иммуноферментного анализа с хемилюминесцентной детекцией с применением технологии биочипов

7 Подготовка к проведению измерений

 

7.1 Приготовление реактивов и реагентов

7.1.1 Приготовление контрольного раствора "Аналитический стандарт"

7.1.1.1 Приготовление контрольного раствора "Аналитический стандарт" при применении тест-системы N 1 (5.2)

Во флакон с контрольным раствором "Аналитический стандарт" (5.2.3) добавляют 1 см³ деионизированной воды, флакон закрывают пробкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают в течение 20 мин, не допуская образования пены.

Восстановленный контрольный раствор "Аналитический стандарт" стабилен в течение 8 ч при хранении его при температуре от 2 °C до 8 °C.

Восстановленный контрольный раствор "Аналитический стандарт" делят на аликвоты объемом 0,1 см³ в пробирках типа Эппендорф или виалах из темного стекла в течение 1 ч после приготовления и хранят при температуре (минус 20 +/- 2) °C не более 1 мес.

После размораживания контрольный раствор "Аналитический стандарт" стабилен в течение 8 ч при хранении его при температуре от 2 °C до 8 °C. Отбирают только необходимое количество материала. Не допускается повторное замораживание восстановленного раствора.

7.1.1.2 Приготовление контрольного раствора "Аналитический стандарт" при применении тест-системы N 2 (5.3)

Во флакон с контрольным раствором "Аналитический стандарт" (5.3.3) добавляют 6 см³ деионизированной воды, флакон закрывают пробкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают в течение 20 мин, не допуская образования пены.

Далее восстановленный контрольный раствор "Аналитический стандарт" готовят по 7.3.2, помещая в центрифужную пробирку вместимостью 30 см³ вместо 5 см³ анализируемого продукта 5 см³ восстановленного контрольного раствора "Аналитический стандарт".

7.1.2 Приготовление контрольного раствора "Положительный стандарт"

Контрольный раствор "Положительный стандарт" используют при применении тест-системы N 3 (5.4).

Во флакон с контрольным раствором "Положительный стандарт" (5.4.2) добавляют 1 см³ буферного раствора для восстановления (5.4.3) и закрывают крышкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают, не допуская образования пены, и оставляют на 20 мин.

Восстановленный контрольный раствор "Положительный стандарт" делят на аликвоты объемом по 0,3 см³ в виалах из темного стекла в течение 1 ч после приготовления и хранят при температуре (минус 20 +/- 2) °C не более 1 мес.

После размораживания контрольный раствор "Положительный стандарт" стабилен в течение 8 ч при хранении его при температуре от 2 °C до 8 °C. Отбирают только необходимое количество материала. Не допускается повторное замораживание восстановленного раствора.

7.1.3 Приготовление рабочего раствора субстрата при применении тест-системы N 1 (5.2) и тест-системы N 2 (5.3)

Рабочий раствор субстрата готовят, смешивая раствор люминола (5.2.4, 5.3.4) и раствор перекиси водорода (5.2.5, 5.3.5), прилагаемые к тест-системе, в пропорции 1:1 (V/V). На одну кассету с биочипами (девять лунок) необходимо приблизительно 3 см³ рабочего раствора субстрата или 0,250 см³ рабочего раствора субстрата на одну лунку.

Во флакон из темного стекла соответствующей вместимости, используя пипет-дозатор с одноразовыми стерильными наконечниками, помещают необходимые количества растворов люминола (5.2.4, 5.3.4) и перекиси водорода (5.2.5, 5.3.5), при этом раствор люминола добавляют к раствору перекиси водорода, избегая воздействия солнечных лучей.

Полученную смесь аккуратно перемешивают в течение 15 мин.

Рабочий раствор субстрата остается стабильным в течение 4 ч при температуре от 15 °C до 25 °C.

7.1.4 Приготовление рабочего буферного раствора для промывания биочипов при применении тест-системы N 1 (5.2) и тест-системы N 2 (5.3)

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 32 см³ концентрата буферного раствора для промывания биочипов (5.2.6, 5.3.6), добавляют небольшое количество деионизированной воды по ГОСТ Р 52501 и аккуратно перемешивают, объем раствора доводят деионизированной водой до метки.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 8 °C - не более 1 мес.

7.2 Подготовка анализатора

Подготовку анализатора проводят в соответствии с прилагаемой к прибору инструкцией.

7.3 Подготовка анализируемой пробы продукта

7.3.1 Подготовка проб продукта при применении тест-системы N 1 и тест-системы N 3

Перед проведением измерения пробы продукта перемешивают, переворачивая не менее трех раз.

Замороженные продукты предварительно размораживают и выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин.

Не допускается проведение измерений проб продукта, если после их размораживания наблюдается выпадение осадка или образование сгустков.

7.3.2 Подготовка проб продукта при применении тест-системы N 2

В центрифужную пробирку вместимостью 30 см³ помещают 5 см³ анализируемого продукта, добавляют 10 см³ ацетонитрила (5.23) и перемешивают на вортексе в течение 60 с. К полученной смеси добавляют (0,05 +/- 0,01) г натрия хлористого (5.26), (2,00 +/- 0,01) г магния сернокислого безводного (5.25) и тщательно перемешивают во избежание образования комочков. Затем, после получения однородной смеси, добавляют 4 см³ н-Гексана (5.24) и перемешивают на вортексе в течение 60 с.

Полученную смесь центрифугируют при 4000 об/мин в течение 8 мин. Дозатором отбирают 4 см³ нижней фракции, переносят в чистую стеклянную пробирку и сушат в токе азота при температуре (50 +/- 2) °C. Полученный сухой остаток растворяют в 0,5 см³ рабочего буферного раствора для промывания, приготовленного по 7.1.4. После этого анализируемая проба продукта подготовлена для проведения измерений.

7.4 Подготовка тест-системы к проведению измерений

7.4.1 Перед применением тест-систему достают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, после чего каждый флакон с реагентами, входящий в тест-систему, перемешивают, аккуратно встряхивая его.

После использования флаконы с реагентами сразу убирают в холодильник.

На всех этапах проведения измерений воздействия прямого солнечного света не допускается.

7.4.2 При применении полуавтоматического иммунохимического анализатора биочипов добавление реактивов проводят при помощи пипетирования по направлению к переднему краю биочипа. Для каждого реагента используют отдельный наконечник пипет-дозатора. Внесение растворов на биочипы проводят осторожно, не касаясь наконечником пипет-дозатора поверхности биочипа.