ГОСТ Р 59326-2021. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочное сырье. Определение наличия ветеринарных препаратов и химиотерапевтических лекарственных средств методом иммуноферментного анализа с хемилюминесцентной детекцией с применением технологии биочипов

9 Проведение измерений

9.1 Проведение измерений с применением полуавтоматического иммунохимического анализатора

9.1.1 Проведение измерений с применением тест-системы N 1

9.1.1.1 В держатель кассет вставляют необходимое количество кассет с биочипами.

Схема заполнения кассеты с биочипами приведена в приложении Б (пункты Б.1.1, Б.1.2).

9.1.1.2 На каждый биочип (лунку) кассеты (5.2.1) наносят по 0,175 см³ аналитического буферного раствора для разведения (5.2.2), обеспечивая равномерное покрытие всей поверхности биочипа.

В лунку 1 добавляют 0,025 см³ контрольного раствора "Аналитический стандарт", приготовленного по 7.1.1.1.

В лунки 2 - 9 добавляют по 0,025 см³ анализируемой пробы продукта, подготовленной по 7.3.

Растворы в лунках перемешивают аккуратным постукиванием (не менее 10 раз) по ребру держателя кассет с биочипами.

9.1.1.3 Держатель кассет с биочипами помещают в термошейкер и перемешивают/инкубируют при температуре (25 +/- 2) °C в течение 30 мин.

9.1.1.4 В каждую лунку вносят по 0,100 см³ раствора ферментного конъюгата (5.2.7) и продолжают перемешивание/инкубирование в термошейкере при температуре (25 +/- 2) °C еще в течение 60 мин.

9.1.1.5 Держатель кассет с биочипами достают из термошейкера и сливают реактивы. Биочипы быстро промывают, добавляя в каждую лунку приблизительно по 0,350 см³ рабочего буферного раствора для промывания биочипов, приготовленного по 7.1.4, и выливая его. Процедуру повторяют дважды, при этом необходимо избегать переполнения лунок, чтобы не допустить попадания посторонних примесей из лунки в лунку.

9.1.1.6 После этого в каждую лунку опять вносят по 0,350 см³ рабочего буферного раствора для промывания биочипов, приготовленного по 7.1.4, аккуратно перемешивают, постукивая по всем краям держателя кассет с биочипами в течение 10 - 15 с, и оставляют в покое на 2 мин. Затем раствор удаляют. Процедуру повторяют четыре раза.

9.1.1.7 После последнего промывания в каждую лунку вносят по 0,350 см³ рабочего буферного раствора для промывания биочипов, приготовленного по 7.1.4, и оставляют до добавления рабочего раствора субстрата в темном месте, но не более чем на 30 мин.

9.1.1.8 С биочипов сливают рабочий буферный раствор, а затем полностью его удаляют, постукивая держателем кассет по безворсовой ткани.

9.1.1.9 В каждую лунку вносят по 0,250 см³ рабочего раствора субстрата, приготовленного по 7.1.3, избегая воздействия солнечных лучей, и оставляют на (120 +/- 10) с.

9.1.1.10 По истечении (120 +/- 10) с держатель кассет с биочипами помещают в иммунохимический анализатор (5.1.1) и проводят измерение интенсивности люминесценции биочипов согласно инструкции, прилагаемой к анализатору.

9.1.2 Проведение измерений с применением тест-системы N 2

9.1.2.1 В держатель кассет вставляют необходимое количество кассет с биочипами.

Схема заполнения кассеты с биочипами приведена в приложении Б (пункты Б.1.1, Б.1.2).

9.1.2.2 На каждый биочип (лунку) кассеты (5.3.1) наносят по 0,100 см³ аналитического буферного раствора для разведения (5.3.2), обеспечивая равномерное покрытие всей поверхности биочипа.

В лунку 1 добавляют 0,100 см³ контрольного раствора "Аналитический стандарт", приготовленного по 7.1.1.2.

В лунки 2 - 9 добавляют по 0,100 см³ анализируемой пробы продукта, подготовленной по 7.3.

9.1.2.3 Держатель кассет с биочипами помещают в термошейкер и перемешивают/инкубируют при температуре (25 +/- 2) °C в течение 30 мин.

9.1.2.4 В каждую лунку вносят по 0,100 см³ раствора ферментного конъюгата (5.3.7) и продолжают перемешивание/инкубирование в термошейкере при температуре (25 +/- 2) °C еще в течение 60 мин.

9.1.2.5 Далее проводят процедуры согласно 9.1.1.5 - 9.1.1.10.

9.2 Проведение измерений с применением автоматического иммунохимического анализатора

9.2.1 В лунку кассеты (5.4.1) вносят 0,500 см³ анализируемой пробы продукта, подготовленной по 7.3.

Схема заполнения кассеты и картриджа с биочипом приведена в приложении Б (пункт Б.1.3).

9.2.2 Кассету с биочипом и реагентами с внесенной по 9.2.1 анализируемой пробой продукта и картридж с наконечниками для дозаторов (5.4.4) помещают в автоматический анализатор (5.1.2) и проводят измерение интенсивности люминесценции биочипов согласно инструкции, прилагаемой к анализатору.

9.2.3 Периодически один раз в 30 дней автоматический анализатор запрашивает проведение контроля качества с использованием контрольного раствора "Положительный стандарт". В этом случае в лунку кассеты (5.4.1) вместо пробы анализируемого продукта вносят 0,500 см³ контрольного раствора "Положительный стандарт", приготовленного по 7.1.2, и далее проводят процедуры согласно 9.2.2.