ГОСТ ISO 16958-2018. Межгосударственный стандарт. Молоко, молочные продукты, смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение состава жирных кислот. Метод капиллярной газовой хроматографии
6 Оборудование и лабораторная посуда
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Поскольку определение связано с использованием летучих легковоспламеняющихся растворителей, все используемые электрические приборы должны соответствовать законодательству, касающемуся опасностей при использовании таких растворителей.
6.1 Аналитические весы, подходящие для взвешивания навесок около 1 мг, с точностью 0,1 мг.
6.2 Мерные колбы вместимостью 50, 100, 250, 300 и 500 см3.
6.3 Пипетки с одной меткой вместимостью 2, 5, 10, 25 и 50 см3, класс AS (ISO 1042).
6.4 Пипетки с двумя метками вместимостью 2 и 5 см3 класса AS (ISO 1042).
6.5 Микропипетка вместимостью 200 мм3.
6.6 Дозаторы вместимостью 2, 5 и 10 см3.
6.7 Пробирка диаметром 26 мм, длиной 100 мм, с резьбовой крышкой с вкладкой из фторопласта.
6.8 Миксер типа "вортекс" для пробирок или аналогичный.
6.9 Лабораторная центрифуга, оснащенная адаптерами для пробирок с наружным диаметром 26 мм.
6.10 Газожидкостный хроматограф, оснащенный пламенно-ионизационным детектором и инжектором с делением или без деления потока. Автосемплер и система для интегрирования, предпочтительно управляемые с помощью компьютера.
Рекомендуется использование максимально чистой посуды и крышек во избежание появления примесей на хроматограмме МЭЖК.
6.10.1 Газ-носитель, водород или гелий, чистотой не менее 99,9997%.
Примечание - Использование водорода или гелия в качестве газа-носителя влияет главным образом на продолжительность хроматографии (т.е. при использовании гелия время анализа увеличивается с 10 до 15 мин), но не оказывает существенного влияния на хроматографическое разрешение при оптимизированных условиях.
Другие газы, необходимые для детектора (FID), должны быть свободны от органических примесей (т.е. содержание углеводородов должно быть менее 1 млн-1) и иметь чистоту не менее 99,995%. Возможно использование синтетического или сжатого воздуха. Также возможно использование газогенератора.
6.10.2 Капиллярная колонка с цианопропилполисилоксаном в качестве неподвижной фазы или его эквивалентом (длина 100 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,2 мкм), при использовании которого элюирование МЭЖК происходит главным образом по длине углеродной цепи, а также в зависимости от количества двойных связей.
Следовые количества кислорода и влаги могут повредить полярную фазу колонки. Если чистый газ недоступен, используют фильтрующее устройство для очистки газа.
6.10.3 Пламенно-ионизационный детектор, с возможностью нагрева до температуры на 50 °C выше конечной температуры в термостате колонки.
6.10.4 Инжектор с делением или без деления потока, способный нагреваться до температуры 30 °C выше конечной температуры термостата колонки.
6.10.5 Инжектор для ввода проб непосредственно в колонку, который может быть не нагретым (холодным) или нагретым до температуры на 30 °C выше конечной температуры в термостате колонки.
Примечание - На одном приборе GC достаточно установить один инжектор (т.е. с делением или без деления потока или инжектор для ввода проб непосредственно в колонку).
6.10.6 Шприц для ввода проб вместимостью 10 мм3.
6.10.7 Система для интегрирования.
6.11 Условия газовой хроматографии
Температура термостата и поток газа-носителя зависят от выбранной колонки и от используемого газа-носителя (т.е. водорода или гелия). Выбранные условия должны обеспечить разделение между цис- и транс-зонами для C18:1, C18:2, C18:3 и конъюгированных линолевых кислот (CLA), как показано в приложении B, рисунки B.1, B.2 и B.3.
Примеры в 6.11.1 и 6.11.2 перечисляют применимые условия для правильного разделения и идентификации цис- и транс-изомеров.
6.11.1 Пример 1. Режим ввода с делением потока
Колонка: длина 100 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,2 мкм, капиллярная колонка из плавленого кварца.
Неподвижная фаза: цианопропилполисилоксан.
Тип газа-носителя: гелий.
Давление газа носителя в колонке: 225 кПа (175 - 225 кПа).
Скорость деления потока: 25,5 см3/мин.
Коэффициент разделения потока: 10:1.
Температура инжектора: 250 °C.
Температура детектора: 275 °C.
Программа температуры термостата: начальная температура 60 °C, выдерживается в течение 5 мин, повышается со скоростью 15 °C мин-1 до 165 °C, выдерживается при этой температуре в течение 1 мин и затем поднимается со скоростью 2 °C мин-1 до 225 °C в течение 20 мин.
Количество вводимой пробы: 1,0 мм3.
Пример полного ГЖХ-профиля МЭЖК, полученного с этими условиями, показан на рисунке B.4 (приложение B).
6.11.2 Пример 2. Режим прямого ввода в колонку
Колонка: длина 100 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,2 мкм, капиллярная колонка из плавленого кварца.
Неподвижная фаза: цианопропилполисилоксан.
Тип газа-носителя: водород.
Давление газа в начале колонки: 210 кПа (175 - 225 кПа).
Температура инжектора: "холодный" инжектор.
Температура детектора: 275 °C.
Программа температуры термостата: начальная температура 60 °C, выдерживается в течение 5 мин, повышается со скоростью 15 °C мин-1 до 165 °C, выдерживается при этой температуре в течение 1 мин и затем поднимается со скоростью 2 °C мин-1 до 225 °C в течение 17 мин.
Количество вводимой пробы: 1,0 мм3.
Пример полного ГЖХ-профиля МЭЖК, полученного с этими условиями, показан на рисунке B.5 (приложение B).
6.12 Разрешение между цис- и транс-изомерами C18:1
Разрешение определяют с введением стандартного раствора смеси цис- и транс-изомеров C18:1 МЭЖК для качественного анализа (по 5.17).
Вводят в газовый хроматограф 1,0 мм3 калибровочного раствора (см. 5.13). Определяют ширину пика на половине высоты и расстояние между левым краем хроматограммы и вершиной пика для транс-13/14 C18:1 и цис-9 C18:1 (метиловый эфир олеиновой кислоты). Критерий разрешения R вычисляют по формуле
, (1)
где tR1 - расстояние в сантиметрах между левым краем хроматограммы и вершиной пика 1 (транс-13/14 C18:1);
tR2 - расстояние в сантиметрах между левым краем хроматограммы и вершиной пика 2 (цис-9 C18:1).
- ширина пика в сантиметрах на половине высоты пика 1 (транс-13/14 C18:1);
- ширина пика в сантиметрах на половине высоты пика 2 (цис-9 C18:1).
Разрешение считается достаточным, когда критерий R составляет не менее (1,00 +/- 5)% (см. приложение B, рисунок B.3).
Примечание - В случае недостаточного разрешения, но с R, близким к целевому значению, тонкая настройка условий хроматографии (т.е. незначительная модификация давления, или скорости потока газа-носителя, или температурной программы термостата) может дать приемлемое значение R.
Подписаться на обновления