ГОСТ ISO 16958-2018. Межгосударственный стандарт. Молоко, молочные продукты, смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение состава жирных кислот. Метод капиллярной газовой хроматографии

5 Реактивы

 

Используют только реагенты признанного аналитического качества, если не указано иное.

5.1 н-гексан [CH₃(CH₂)₄CH₃], для хроматографии.

5.2 Метанол [CH₃OH], для хроматографии.

5.3 Вода, квалификации для ВЭЖХ или эквивалентной.

5.4 Метанольный раствор метилата натрия [CH₃ONa], с массообъемной концентрацией 30 или 25%, в зависимости от доступности в стране.

5.5 Переэтерифицирующий раствор (метанольный раствор метилата натрия с массообъемной концентрацией 5% м/об).

В мерную колбу вместимостью 300 см³ вносят 50 см³ раствора метилата натрия 30% об. (или 60 см³ 25% об. раствора метилата натрия) и осторожно смешивают с 250 см³ метанола, перемешивая магнитной мешалкой. Удаляют магнитную мешалку, затем охлаждают до комнатной температуры и доводят до метки метанолом.

Раствор стабилен в течение одной недели при хранении в темном месте при температуре 4 °C. Перед использованием дожидаются, пока температура раствора станет комнатной. Полученного объема раствора достаточно для анализа примерно 40 проб. В случае меньшего количества анализов объем реагента может быть соответствующим образом скорректирован.

Реакцию переэтерификации выполняют при температуре окружающей среды от 20 до 25 °C.

Примечание - Значение объема, указанное в скобках, соответствует раствору с массообъемной концентрацией метилата натрия 25%.

 

5.6 Цитрат натрия двузамещенный семиводный [HOC(COOH)(CH₂COONa)₂·1,5H₂O].

5.7 Хлорид натрия [NaCl].

5.8 Раствор для нейтрализации (цитрат натрия двузамещенный семиводный 10% об., хлорид натрия 15% об. в воде).

Взвешивают 50,0 г двузамещенного семиводного цитрата натрия и 75,0 г хлорида натрия в мерной колбе вместимостью 500 см³. Растворяют в 450 см³ воды с помощью магнитной мешалки. Удаляют магнитную мешалку, затем доводят до метки водой.

Раствор стабилен в течение одного месяца при хранении в темном месте при температуре 4 °C. В процессе хранения могут образовываться кристаллы соли, однако они исчезают после встряхивания.

Дожидаются, пока температура раствора станет комнатной. Полученного объема раствора достаточно для анализа примерно 40 образцов или более. В случае меньшего количества анализов (или одного анализа) масса и объем раствора могут быть соответствующим образом скорректированы.

5.9 Трет-бутилметиловый эфир (МТБЭ), для хроматографии.

5.10 Метил ундеканоат (C11:0 МЭЖК), с массовой долей основного вещества не менее 99%.

5.11 Тритридеканоин (C13:0 ТАГ), с массовой долей основного вещества не менее 99%.

5.12 C11:0 МЭЖК/C13:0 ТАГ стандартный раствор

В мерную колбу вместимостью 250 см³ взвешивают около 500 мг (с точностью до 0,1 мг) тритридеканоина и 500 мг метил ундеканоата. Растворяют и доводят до отметки МТБЭ.

Раствор стабилен в течение одной недели при хранении в темном месте при температуре 4 °C. Дожидаются, пока температура раствора станет комнатной. Полученного объема раствора достаточно для анализа примерно 40 образцов или более. В случае меньшего количества анализов можно соответствующим образом скорректировать навеску стандартов и объем растворителя.

5.13 Метиловые эфиры октадеценовой кислоты: смесь метиловых эфиров цис- и транс-изомеров C18:1: от транс-4- до транс-16-октадеценовой кислоты (все изомеры) и основные цис-изомеры. Концентрация 2,5 мг/см³ в метиленхлориде.

Примечание - Этот стандарт является коммерчески доступным <1>.

 

5.14 Метиловые эфиры линолевой кислоты: смесь метиловых эфиров цис- и транс-изомеров C18:2: транс-9, транс-12-октадекадиеновой кислоты (приблизительно 50%), цис-9, транс-12-октадекадиеновой кислоты (приблизительно 20%) транс-9, цис-12-октадекадиеновой кислоты (приблизительно 20%) и цис-9, цис-12-октадекадиеновой кислоты (приблизительно 10%). Концентрация 10 мг/см³ в метиленхлориде.

Примечание - Этот стандарт является коммерчески доступным <1>.

--------------------------------

<1> Supelco Inc., торговая марка Sigma Aldrich, каталожный номер 40495-U и каталожный номер 47791, является примером подходящего продукта, доступного на коммерческой основе. Эта информация предоставляется для удобства пользователей этого стандарта. Возможно применение аналогичных продуктов, если может быть показано, что их использование приводит к получению таких же результатов.

 

5.15 Смесь метиловых эфиров цис- и транс-изомеров линоленовой кислоты (18:3), включающая:

- цис-9, цис-12, цис-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 3%),

- цис-9, цис-12, транс-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 7%),

- цис-9, транс-12, цис-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 7%),

- цис-9, транс-12, транс-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 15%),

- транс-9, цис-12, цис-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 7%),

- транс-9, цис-12, транс-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 15%),

- транс-9, транс-12, цис-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 15%) и

- транс-9, транс-12, транс-15-октадекатриеновой кислоты метиловый эфир (около 30%).

Концентрация 10 мг/см³ в метиленхлориде.

Примечание - Этот стандарт является коммерчески доступным <2>. Данный стандарт содержит все транс-изомеры C18:3 (всего восемь), но их количество и соотношения отличаются от наблюдаемых в рафинированных/дезодорированных маслах и жирах.

--------------------------------

<2> Supelco Inc., торговая марка Sigma Aldrich, каталожный номер 47792, является примером подходящего продукта, доступного на коммерческой основе. Эта информация предоставляется для удобства пользователей этого стандарта. Возможно применение аналогичных продуктов, если может быть показано, что их использование приводит к получению таких же результатов.

 

5.16 Смесь метиловых эфиров конъюгированной октадекадиеновой кислоты: смесь цис-9, транс-11- и цис-10, транс-12-метилоктадекадиеноатов с чистотой не менее 99%.

Примечание - Этот стандарт является коммерчески доступным <3>. Этот стандарт содержит два основных изомера CLA, но соотношение изомеров может варьироваться от партии к партии.

--------------------------------

<3> Supelco Inc., торговая марка Sigma Aldrich, каталожный номер 05507, является примером подходящего продукта, доступного на коммерческой основе. Эта информация предоставляется для удобства пользователей этого стандарта. Возможно применение аналогичных продуктов, если может быть показано, что их использование приводит к получению таких же результатов.

 

5.17 Стандартный раствор смеси цис- и транс-изомеров для качественного анализа.

Для определения времен удерживания (RT) цис- и транс-изомеров (т.е. C18:1, C18:2, C18:3 и CLA) подготавливают стандартный раствор для качественного анализа со стандартами, перечисленными в 5.13 - 5.16. Могут быть использованы любые стандарты, которые имеются в продаже. В мерную колбу вместимостью 50 см³ добавляют каждый стандартный раствор изомеров в равном соотношении. Добавляют гексан, растворяют и доводят до метки. Разбавляют в соответствии с типом используемого инжектора.

5.18 Калибровочный раствор стандартов МЭЖК

5.18.1 Приготовление из индивидуальных стандартов МЭЖК

5.18.1.1 Для приготовления калибровочного раствора используют следующие индивидуальные стандарты МЭЖК (чистотой не менее 99%):

- метиловый эфир масляной кислоты (C4:0);

- метиловый эфир капроновой кислоты (C6:0);

- метиловый эфир каприловой кислоты (C8:0);

- метиловый эфир каприновой кислоты (C10:0);

- метиловый эфир ундекановой кислоты (C11:0);

- метиловый эфир лауриновой кислоты (C12:0);

- метиловый эфир тридекановой кислоты (C13:0);

- метиловый эфир миристиновой кислоты (C14:0);

- метиловый эфир миристолеиновой кислоты (C14:1 цис-9 или n-5);

- метиловый эфир пентадекановой кислоты (C15:0);

- метиловый эфир цис-10-пентадеценовой кислоты (C15:1 цис-10 или n-5);

- метиловый эфир пальмитиновой кислоты (C16:0);

- метиловый эфир цис-9-пальмитолеиновой кислоты (C16:1 цис-9 или n-7);

- метиловый эфир гептадекановой кислоты (C17:0);

- метиловый эфир цис-10-гептадеценовой кислоты (C17:1 цис-10 или n-7);

- метиловый эфир стеариновой кислоты (C18:0);

- метиловый эфир элаидиновой кислоты (C18:1 транс-9 или n-9);

- метиловый эфир олеиновой кислоты (C18:1 цис-9 или n-9);

- метиловый эфир линолеидиновой кислоты (C18:2 все транс-9, 12 или n-6);

- метиловый эфир линолевой кислоты (C18:2 все цис-9, 12 или n-6);

- метиловый эфир арахидовой кислоты (C20:0);

- метиловый эфир гамма-линолевой кислоты (C18:3 все цис-6, 9, 12 или n-6);

- метиловый эфир цис-11-эйкозеновой кислоты (C20:1 цис-11 или n-9);

- метиловый эфир линоленовой кислоты (C18:3 все цис-9, 12, 15 или n-3);

- метиловый эфир генейкозановой кислоты (C21:0);

- метиловый эфир цис-11, 14-эйкозадиеновой кислоты (C20:2 все цис-11, 14 или n-6);

- метиловый эфир бегеновой кислоты (C22:0);

- метиловый эфир цис-8, 11, 14-эйкозатриеновой кислоты (C20:3 все цис-8, 11, 14 или n-6 цис);

- метиловый эфир эруковой кислоты (C22:1 цис-13 или n-9);

- метиловый эфир цис-11, 14, 17-эйкозатриеновой кислоты (C20:3 все цис-11, 14, 17 или n-3);

- метиловый эфир арахидоновой кислоты (C20:4 все цис-5, 8, 11, 14 или n-6);

- метиловый эфир цис-13, 16-докозадненовой кислоты (C22:2 все цис-13, 16 или n-6);

- метиловый эфир лигноцериновой кислоты (C24:0);

- метиловый эфир цис-5, 8, 11, 14, 17-эйкозапентаеновой кислоты (C20:5 все цис-5, 8, 11, 14, 17 или n-3);

- метиловый эфир нервоновой кислоты (C24:1 цис-15 или n-9);

- метиловый эфир цис-4, 7, 10, 13, 16, 19-докозагексаеновой кислоты (C22:6 все цис-4, 7, 10, 13, 16, 19 или n-3).

Примечание - Приобретение отдельных стандартов МЭЖК является более дорогостоящим, чем стандартная смесь МЭЖК. Кроме того, индивидуальное взвешивание каждого стандарта МЭЖК может дать неточность и требует высокой точности взвешивания.

 

5.18.1.2 Стандартный раствор 1 - насыщенные МЭЖК

В мерную колбу вместимостью 100 см³ взвешивают около 25 мг (с точностью 0,1 мг) метилового эфира лигноцериновой кислоты (C24:0), 25 мг метилового эфира бегеновой кислоты (C22:0), 25 мг метилового эфира генейкозановой кислоты (C21:0), 25 мг метилового эфира арахидовой кислоты (C20:0), 25 мг метилового эфира стеариновой кислоты (C18:0), 25 мг метилового эфира гептадекановой кислоты (C17:0), 50 мг метилового эфира пальмитиновой кислоты (C16:0), 25 мг метилового эфира пентадекановой кислоты (C15:0), 25 мг метилового эфира миристиновой кислоты (C14:0), 25 мг метилового эфира тридекановой кислоты (C13:0), 25 мг лауриновой кислоты (C12:0), 25 мг метилового эфира каприновой кислоты (C10:0), 25 мг метилового эфира каприловой кислоты (C8:0), 25 мг метилового эфира ундекановой кислоты, 25 мг метилового эфира капроновой кислоты (C6:0) и 25 мг метилового эфира масляной кислоты (C4:0). Доводят до метки гексаном.

Пальмитиновую кислоту отвешивают в двойном количестве. Метиловые эфиры короткоцепочечных жирных кислот (т.е. C4:0, C6:0 и C8:0) являются летучими и отвешиваются в конце процедуры.

5.18.1.3 Стандартный раствор 2 - мононенасыщенные МЭЖК

В мерную колбу вместимостью 100 см³ аккуратно взвешивают около 25 мг (с точностью до 0,1 мг) метилового эфира нервоновой кислоты (C24:1 цис-15 или n-9), 25 мг метилового эфира эруковой кислоты (C22:1 цис-13 или n-9), 25 мг метилового эфира цис-11-эйкозеновой кислоты (C20:1 цис-11 или n-9), 25 мг метилового эфира олеиновой кислоты (C18:1 цис-9 или n-9), 25 мг метилового эфира элаидиновой кислоты (C18:1 транс-9 или n-9), 25 мг метилового эфира цис-10-гептадеценовой кислоты (C17:1 цис-10 или n-7), 25 мг пальмитолеиновой кислоты (C16:1 цис-9 или n-7), 25 мг метилового эфира цис-10-пентадеценовой кислоты (C15:1 цис-10 или n-5) и 25 мг метилового эфира миристолеиновой кислоты (C14:1 цис-9 или n-5). Доводят до метки н-гексаном.

5.18.1.4 Стандартный раствор 3 - полиненасыщенные МЭЖК

В мерную колбу вместимостью 100 см³ взвешивают около 25 мг (с точностью до 0,1 мг) метилового эфира линолеидиновой кислоты (C18:2 все транс-9, 12 или n-6), 25 мг метилового эфира линолевой кислоты (C18:2 все цис-9, 12 или n-6), 25 мг метилового эфира гамма-линолевой кислоты (C18:3 все цис-9, 12 или n-6), 25 мг метилового эфира линоленовой кислоты (C18:3 все цис-12, 15 или n-3), 25 мг метилового эфира цис-11, 14-эйкозадиеновой кислоты (C20:2 все цис-11, 14 или n-6), 25 мг метилового эфира цис-8, 11, 14-эйкозатриеновой кислоты (C20:3 все цис-8, 11, 14 или n-6), 25 мг метилового эфира цис-11, 14, 17-эйкозатриеновой кислоты (C20:3 все цис-11, 14, 17 или n-3), 25 мг метилового эфира арахидоновой кислоты (C20:4 все цис-5, 8, 11, 14 или n-6), 25 мг метилового эфира цис-13, 16-докозадиеновой кислоты (C22:2 все цис-13, 16 или n-6), 25 мг метилового эфира цис-5, 8, 11, 14, 17-эйкозапентаеновой кислоты (C20:5 все цис-5, 8, 11, 14, 17 или n-3) и 25 мг метилового эфира цис-4, 7, 10, 13, 16, 19-докозагексаеновой кислоты (C22:6 все цис-4, 7, 10, 13, 16, 19 или n-3). Доводят до метки н-гексаном.

5.18.1.5 Подготовка калибровочного раствора стандартов МЭЖК

В мерную колбу вместимостью 100 см³ пипеткой вносят 25,0 см³ исходного раствора калибровочного стандартного раствора 1 (по 5.18.1.2), 25,0 см³ исходного раствора калибровочного стандартного раствора 2 (по 5.18.1.3) и 25,0 см³ калибровочного стандартного раствора 3 (по 5.18.1.4). Затем доводят до метки н-гексаном. Разбавляют в соответствии с типом используемого инжектора.

Раствор стабилен в течение примерно шести месяцев при хранении в темном месте при температуре минус 20 °C. Чтобы предотвратить загрязнение стандартного раствора, раствор разливают в разные флаконы (готовые к инъекции) и хранят их при температуре минус 20 °C перед использованием. Каждый флакон используют только один раз, затем выбрасывают.

5.18.2 Приготовление из стандартной смеси МЭЖК

5.18.2.1 Стандартная смесь МЭЖК для количественного анализа

Приобретают стандартную смесь МЭЖК <1>.

--------------------------------

<1> Nu-Check-Prep, каталожный номер GLC-Nestle36, является примером подходящего продукта, доступного на коммерческой основе. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта. Возможно применение аналогичных продуктов, если может быть показано, что их использование приводит к получению таких же результатов.

 

Стандартная калибровочная смесь МЭЖК изготавливается поставщиком путем точного дозирования по массе. Массовая доля в процентах каждого компонента указана в сопроводительном сертификате. Каждая ампула содержит приблизительно 100 мг стандартной смеси МЭЖК для калибровки. Все индивидуальные стандарты МЭЖК содержатся в равных соотношениях в стандартной смеси, за исключением метилового эфира пальмитиновой кислоты (C16:0), который добавляется в двойном количестве.

5.18.2.2 Приготовление калибровочной смеси стандартов МЭЖК

Перед использованием дожидаются нагрева ампулы до комнатной температуры (не более 25 °C) в темном месте без дополнительного нагревания. Вскрывают ампулу стеклянным ножом, используя пипетку Пастера, быстро переносят содержимое ампулы в предварительно тарированную мерную колбу вместимостью 50 см³, взвешивают и доводят до метки н-гексаном. Разбавляют в соответствии с типом используемого инжектора.

Раствор стабилен в течение примерно шести месяцев при хранении в темном месте при температуре минус 20 °C. Чтобы предотвратить загрязнение стандартного раствора, разливают раствор в разные флаконы (готовые к инъекции) и хранят их при температуре минус 20 °C перед использованием. Каждый флакон используют только один раз, затем выбрасывают.