ГОСТ ISO 16958-2018. Межгосударственный стандарт. Молоко, молочные продукты, смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение состава жирных кислот. Метод капиллярной газовой хроматографии
9.2 Количественное определение
9.2.1 Определение факторов отклика
Трижды вводят 1 мм3 калибровочного раствора (см. 5.18.1.5 или 5.18.2.2).
9.2.2 Исследование анализируемой пробы
Вводят 1 мм3 анализируемой пробы (по 9.1) в газовый хроматограф, применяя те же условия, что и для калибровочного раствора стандартов МЭЖК.
9.2.3 Идентификация жирных кислот
Идентифицируют жирные кислоты на хроматограмме раствора образца, сравнивая времена их удерживания с соответствующими значениями для пиков в стандартном калибровочном растворе (по 5.18) и в качественной стандартном растворе для качественного анализа, содержащем все изомеры ТЖК и CLA (см. 5.13 и 5.17).
Идентификация C18:1 ТЖК
Идентифицируют и группируют все транс-изомеры C18:1 (включая также площадь пика транс-16 C18:1, элюируемого в области цис-C18:1 хроматограммы сразу после цис-9 C18:1 или n-9) в соответствии с приложением B, рисунками B.1 или B.2.
Примечание - Когда присутствует молочный жир, два транс-изомера C18:1 элюируются в области цис-C18:1 (C18:1 транс-15 и C18:1 транс-16), но на капиллярной колонке длиной 100 м выделяется только один изомер (C18:1 транс-16). Второй изомер (C18:1 транс-15), как правило, перекрывается пиком олеиновой кислоты (C18:1 цис-9), и количественная оценка его площади возможна только при использовании предварительного разделения (т.е. ТСХ А+, ВЭЖХ А+) с последующим капиллярным ГЖХ-анализом. Согласно последним данным, было продемонстрировано отсутствие существенной разницы в суммарном количестве C18:1 ТЖК при исключении площади пика C18:1 транс-15 (неразделенный пик) из суммы по сравнению с результатом, полученным после предварительных методов разделения с последующим капиллярным анализом ГЖХ. Часть этого феномена объясняется присутствием некоторых цис-изомеров C18:1 (т.е. цис-6-8), которые элюируются в транс-области C18:1 и, следовательно, добавляются косвенно к сумме ТЖК C18:1. Вклад этих изомеров в сумму ТЖК C18:1 компенсирует тот факт, что C18:1 транс-15 не принимается во внимание.
Идентификация C18:2 ТЖК
Идентифицируют и группируют все транс-изомеры линолевой кислоты (см. приложение B, рисунки B.1, B.2 и B.6). Включают все транс-изомеры, присутствующие в образце молочного жира, в сумму ТЖК C18:2, как показано на рисунках B.1 и B.2.
Идентификация C18:3 ТЖК
Идентифицируют и группируют все ТЖК линоленовой кислоты (см. приложение B, рисунки B.1, B.2 и B.6).
Примечания
1 В случае присутствия в образце молочного жира и/или рыбного жира другой изомер C20:1 элюируется непосредственно перед C20:1 цис-11 (или n-9). В зависимости от разрешения колонки время удерживания этой жирной кислоты может также соответствовать транс-изомеру C18:3 (т.е. C18:3 цис-9, транс-12, цис-15 или C18:3 транс-9, цис-12, цис-15). Когда в соответствующей зоне ТЖК C18:3 имеется только один пик, его правильная идентификация соответствует изомеру C20:1. Когда два, три или четыре пика встречаются в соответствующей зоне для ТЖК C18:3, каждый пик включают в сумму площадей ТЖК C18:3 (см. порядок элюирования и правила группировки ниже). Также могут наблюдаться интерференции между изомерами ТЖК C18:3 [т.е. C18:3 цис-9, цис-12, транс-15; цис-9, транс-12, цис-15 или C18:3 транс-9, цис-12, цис-15 и C20:1 цис-11 (или n-9)]. C20:1 цис-11 (или n-9) может элюироваться с C18:3 цис-9, транс-12, цис-15 (минорный транс-изомер C18:3), но его вклад в общую концентрацию ТЖК C18:3 пренебрежимо мал. Однако если C20:1 цис-11 (или n-9) интерферирует с C18:3 цис-9, цис-12, транс-12 или с C18:3 транс-9, цис-12, цис-15, условия могут быть слегка изменены, чтобы получить достаточное разделение. Интерференция может также быть обнаружена, когда наблюдается неправильное соотношение между C18:3 цис-9, цис-12, транс-15 и C18:3 транс-9, цис-12, цис-15 (соотношение между этими изомерами всегда близко к 5:4).
2 Кинетика образования транс-изомеров C18:3 в рафинированных и дезодорированных маслах была проанализирована с использованием высокополярной капиллярной колонки и хорошо описана в литературе. Они могут использоваться в качестве подтверждающего инструмента для проверки присутствия транс-изомеров C18:3. Чаще всего встречается максимум четыре транс-изомера C18:3.
Вариант 1 - отсутствие изомеров ТЖК C18:3
Нет пика (если обнаружен только один пик, см. комментарий выше о присутствии другого изомера C20:1 в молоке). Наличие одного транс-изомера C18:3 невозможно.
Вариант 2 - присутствие двух изомеров ТЖК C18:3 (C18:3 цис-9, цис-12, транс-15 и C18:3 транс-9, цис-12, цис-15)
Площадь пика C18:3 транс-9, цис-12, цис-15 составляет приблизительно 80% от площади пика C18:3 цис-9, цис-12, транс-15 (или соотношение 5:4). Это отношение всегда является постоянным, когда присутствуют другие транс-изомеры C18:3.
Вариант 3 - наличие трех изомеров ТЖК C18:3 (C18:3 цис-9, цис-12, транс-15; C18:3 цис-9, транс-12, цис-15 C18:3 и транс-9, цис-12, цис-15)
То же, что описано выше для случая 2 (два изомера), но с присутствием C18:3 цис-9, транс-12, цис-15. Площадь пика этого транс-изомера всегда мала, а иногда ниже, чем предел количественного определения (LOQ). В случае совместного элюирования этого транс-изомера с C20:1 цис-11 (n-9) или с другим изомером C20:1 его вклад в сумму ТЖК C18:3 является незначительным.
Вариант 4 - присутствие четырех изомеров ТЖК C18:3 (C18:3 транс-9, цис-12, транс-15; C18:3 цис-9, цис-12, транс-15; C18:3 цис-9, транс-12, цис-15 и C18:3 транс-9, цис-12, цис-15).
То же, что описано выше для случая 3 (три транс-изомера), но с C18:3 транс-9, цис-12, транс-15. Этот изомер образуется при частичной деградации C18:3 цис-9, цис-12, транс-15 и C18:3 транс-9, цис-12, цис-15 (первые два транс-изомера C18:3 встречаются в дезодорированных растительные масла). Когда его количество составляет не менее 50% от площади пика C18:3 цис-9, цис-12, транс-15, можно предположить наличие других транс-изомеров C18:3 и указывать на аномальные условия дезодорации масла (т.е. высокая температура и/или выдержка). См. также приложение B, рисунок B.6, где показан реальный пример образца детского питания, содержащего ТЖК C18:2 и ТЖК C18:3, появляющихся из дезодорированных растительных масел.
Присутствие других транс-изомеров C18:3 может быть подтверждено введением качественной стандартной смеси (см. 5.17).
Для выражения результатов по содержанию ТЖК используют следующие термины:
- ТЖК C18:1 представляет собой сумму транс-позиционных изомеров C18:1;
- ТЖК C18:2 представляет собой сумму транс-изомеров C18:2 (линолевая кислота) в дезодорированных маслах (т.е. C18:2 транс-9, транс-12; C18:2 цис-9, транс-12 и C18:2 транс-9, 12) и в молочном жире (т.е. C18:2 цис-9, транс-13; C18:2 транс-8, цис-12 и C18:2 транс-11, цис-15);
- ТЖК C18:3 представляет собой сумму транс-изомеров C18:3 (линоленовая кислота) в дезодорированных маслах (транс-9, цис-12, транс-15, цис-9, цис-12, транс-15, цис-9, транс-12, цис-15 и транс-9, цис-12, цис-15);
- совокупность ТЖК представляет собой сумму C18:1 ТЖК, C18:2 ТЖК и C18:3 ТЖК.
Примечания
1 Метод предназначен для количественного определения всех ТЖК в пищевых продуктах (т.е. продуктов, происходящих от жвачных животных, процесса гидрирования и/или дезодорации масла). Этот способ не предназначен для определения происхождения ТЖК C18:1 и C18:2 (т.е. натуральных ТЖК или ТЖК искусственного происхождения) в сложных пищевых продуктах, содержащих ТЖК различной природы (т.е. жира от жвачных животных, гидрированного и дезодорированного растительного масла). Оценка может быть проведена с использованием распределения и/или отношения транс-изомеров C18:1 (т.е. C18:1 транс-9 и C18:1 транс-11) в присутствии ТЖК C18:2 и C18:3, образующихся в процессе дезодорации, а также учитывая распределение/количество некоторых жирных кислот в полном профиле жирных кислот. Количественное определение ТЖК, имеющих разное происхождение, является более точным при анализе отдельных ингредиентов.
2 Жирные кислоты с разветвленной цепью (т.е. насыщенные изо- и антеизо-метил-разветвленные жирные кислоты) также присутствуют в молочных жирах, они элюируются с другими текущими жирными кислотами. В чистых молочных жирах разветвленные жирные кислоты, которые наиболее часто встречаются, содержат от 14 до 17 атомов углерода в цепи и составляют от 1 до 2% в профиле молочного жира. Таким образом, эта категория жирных кислот в стандарте не рассматривается. Тем не менее соответствующие площади пиков этих жирных кислот и/или других неидентифицированных жирных кислот могут быть добавлены в сумму "других жирных кислот" (ДЖК). Для их количественного определения может быть использован коэффициент отклика, являющийся средним значением коэффициентов отклика (от C12:0 до C24:0). Для получения дополнительной информации см. приложение B, рисунок B.7.
Подписаться на обновления