ГОСТ Р 57989-2017. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукция пищевая специализированная. Методы выявления патогенных микроорганизмов на основе полимеразной цепной реакции

5.3 Приготовление питательных сред

5.3.1 Приготовление и контроль качества питательных сред осуществляют в соответствии с ГОСТ ISO 11133 согласно прописям, указанным на этикетках или в инструкциях изготовителя. Допускается применение сред лабораторного приготовления из отдельных компонентов.

5.3.2 Питательный агар с 1% глюкозы и питательный бульон с 1% глюкозы (МПА с 1% глюкозы, МПБ с 1% глюкозы) готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1.

5.3.3 ТСБДЭ и ТСАДЭ готовят в соответствии со следующей прописью (г/дм³):

ферментативный гидролизат казеина - 17,0;

пептон соевый - 3,0;

натрий хлористый - 5,0;

фосфат калия однозамещенный - 2,5;

D-глюкоза - 2,5;

дрожжевой экстракт - 6,0;

агар микробиологический (для ТСАДЭ) - 15,0.

Компоненты растворяют в 1000 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают pH (7,3 +/- 0,2) ед. pH и автоклавируют при 121 °C в течение 15 мин. Готовые среды разливают в стерильные колбы или пробирки и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °C.

5.3.4 Среду Кесслер с глюкозой готовят в соответствии со следующей прописью:

пептон мясной ферментативный - 10 г;

D-глюкоза - 2,5 г;

желчь крупного рогатого скота сухая - 5 г (натуральная 50 см³);

1%-ный водный раствор кристаллического фиолетового (генцианвиолета) - 2 см³;

дистиллированная вода - 1000 см³.

Компоненты растворяют в 900 см³ дистиллированной воды, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1 - 2 мин, доводят объем до 1 дм³, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45 - 55 °C. pH среды устанавливают таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,3 +/- 0,2) при температуре 25 °C. Разливают в пробирки с поплавками по 10 см³, автоклавируют при (114 +/- 1,0) °C в течение 20 мин.

5.3.5 Глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью готовят в соответствии со следующей прописью:

пептон мясной ферментативный - 10 г;

D-глюкоза - 5 г;

натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный, Na₂HPO₄ - 6,45 г;

калий фосфорнокислый однозамещенный безводный, KH₂PO₄ - 2 г;

желчь крупного рогатого скота сухая - 20 г (натуральная 200 см³);

0,5%-ный водный раствор бриллиантового зеленого - 3 см³;

дистиллированная вода - до 1000 см³.

Компоненты растворяют в 900 см³ дистиллированной воды, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1 - 2 мин, доводят объем до 1 дм³, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45 - 55 °C. pH устанавливают таким образом, чтобы он составлял (7,2 +/- 0,1) ед. pH при температуре 25 °C, после чего повторно доводят до кипения. Разливают в стерильные пробирки с поплавками по 10 см³.

5.3.6 Бульон Мак-Конки с глюкозой готовят в соответствии с ГОСТ 31747.

5.3.7 Среду Кесслер с лактозой готовят в соответствии с ГОСТ 31747.

5.3.8 Лактозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью готовят в соответствии с ГОСТ 31747.

5.3.9 Селенитовый бульон в модификации Лейфсона готовят в соответствии с ГОСТ 31659.

5.3.10 RVS-бульон готовят в соответствии с ГОСТ 31659.

5.3.11 МКТ-бульон готовят в соответствии с ГОСТ 31659.

5.3.12 Среду обогатительную селективную - бульон для бактерий рода Shigella готовят в соответствии с ГОСТ 32010.

5.3.13 Селективный бульон Престона для накопления кампилобактерий готовят в соответствии со следующей прописью:

Основа среды:

пептон мясной ферментативный - 10 г;

мясной экстракт - 10 г;

натрий хлористый - 5 г;

вода - 920 см³.

Компоненты среды растворяют в дистиллированной воде. При наличии нерастворившегося осадка раствор подогревают до кипения для полного растворения частиц. pH раствора доводят до величины (7,5 +/- 0,2) ед. pH с помощью 0,1 M раствора HCl или 0,1 M раствора NaOH. Стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин. Остужают до 45 - 50 °C.

Готовая среда:

Перед использованием в 920 см³ бульона асептически добавляют: 70 см³ стерильной дефибринированной крови барана, растворенное в 50%-ном растворе ацетона содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков для кампилобактерий IV (по Престону) и растворенное в стерильной дистиллированной воде содержимое двух флакончиков ростовой добавки для кампилобактерий или 4 см³ аэротолерантной добавки по 5.1.6, тщательно перемешивают и разливают среду по 90,0 см³ в колбы или флаконы вместимостью 250 см³ или по 9,0 см³ в пробирки.

5.3.14 Селективный бульон Дойла для накопления кампилобактерий готовят в соответствии со следующей прописью:

Основа среды:

ферментативный гидролизат казеина - 10 г;

пептон мясной ферментативный - 10 г;

дрожжевой экстракт - 2 г;

D-глюкоза - 1 г;

натрий хлористый - 5 г;

натрия гидросульфит - 0,1 г;

натрия сукцинат - 3 г;

L-цистеина гидрохлорид - 0,1 г;

дистиллированная вода - 920 см³.

Растворяют компоненты среды в дистиллированной воде (при использовании готовой основы указанного состава промышленного изготовления количество согласно прописи на этикетке). При наличии нерастворившегося осадка подогревают до кипения для полного растворения частиц. Устанавливают pH = (7,0 +/- 0,2) ед. pH при 25 °C. Стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин. Остужают до температуры 45 °C.

Готовая среда:

Перед использованием в 460 см³ основы асептически добавляют 35 см³ стерильной дефибринированной крови барана, а также растворенное в 5 см³ 50%-ного раствора этанола содержимое одного флакончика с добавкой антибиотиков модифицированной III (по Дойлу). Тщательно перемешивают и разливают в по 90,0 см³ в колбы или флаконы вместимостью 250 см³ или по 9,0 см³ в пробирки.

5.3.15 Бульон Фрейзера

Бульон Фрейзера полуконцентрированный для предварительного селективного обогащения и бульон Фрейзера для селективного (вторичного) обогащения готовят в соответствии с ГОСТ 32031.