ГОСТ Р 57989-2017. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукция пищевая специализированная. Методы выявления патогенных микроорганизмов на основе полимеразной цепной реакции

5 Подготовка к проведению испытаний

 

5.1 Приготовление растворов и реактивов

5.1.1 Изотонический 0,85%-ный водный раствор хлорида натрия готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1.

5.1.2 Растворы и реактивы для окраски микроскопических препаратов по Граму, растворы красителей (кристаллического фиолетового, генцианвиолета, сафранина, бриллиантового зеленого, бромкрезолового пурпурного и др.), растворы гидроокиси натрия и соляной кислоты для нейтрализации высококислотных продуктов готовят в соответствии ГОСТ 10444.1 или по прописям, указанным на этикетках соответствующих препаратов промышленного производства.

5.1.3 Фосфатно-буферный раствор

Приготовление концентрированного раствора: (34 +/- 0,4) г однозамещенного фосфорнокислого калия (KH₂PO₄) растворяют в 500,0 - 700,0 см³ дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см³ по ГОСТ 1770. Активную кислотность раствора (7,2 +/- 0,1) ед. pH устанавливают добавлением 1 H раствора гидроокиси натрия и доводят дистиллированной водой до 1000,0 см³. Полученный раствор хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой, в условиях холодильника не более 30 сут.

Приготовление разбавленного раствора: 1,25 см³ концентрированного раствора вносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 1000 см³ по ГОСТ 1770 и доводят объем дистиллированной водой до метки, проверяют активную кислотность, которая должна составлять (7,1 +/- 0,1) ед. pH.

ФБР разливают по 9,0 см³ в пробирки, по 90,0 см³ в колбы вместимостью 250 см³ по ГОСТ 1770 и по 900,0 см³ в колбы вместимостью 2000 см³ по ГОСТ 1770, закрывают ватными пробками. Стерилизуют в автоклаве при (121 +/- 1) °C в течение (20 +/- 1) мин.

5.1.4 При добавлении к 1 дм³ ФБР-хлористого натрия в количестве 9 г до стерилизации получают фосфатный буферный 0,9%-ный раствор NaCl.

5.1.5 ЗПВ готовят по ГОСТ 31659.

5.1.6 Аэротолерантная добавка для кампилобактерий

Аэротолерантную добавку для селективных бульонов Престона и Дойла готовят по следующей прописи:

натрий пировинограднокислый - 6,25 г;

железо (II) сернокислое - 6,25 г;

натрий метабисульфит - 6,25 г;

стерильная дистиллированная вода - 100 см³.

Натрий пировинограднокислый растворяют в 10 - 20 см³ стерильной дистиллированной воды, добавляют железо (II) сернокислое и натрия метабисульфит, доводят объем раствора до 100 см³. Разливают в пробирки по 4 см³. Хранят в защищенном от света месте при температуре минус 20 °C не более 1 мес. Раствор чрезвычайно чувствителен к воздействию света, после его добавления к питательным средам их необходимо сохранять в защищенном от света месте.