ГОСТ 34108-2017. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным методом

Приложение А

(рекомендуемое)

 

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ГРАДУИРОВОЧНЫХ РАСТВОРОВ МИКОТОКСИНОВ

 

А.1 Для построения градуировочной характеристики используют разбавляющий раствор (см. таблицу 3) в качестве нулевой точки и четыре градуировочных раствора, значения массовой концентрации микотоксинов в которых приведены в таблице А.1. Порядок приготовления градуировочных растворов приведен в А.2 - А.7.

 

Таблица А.1

 

Наименование показателя	Номер градуировочного раствора
	1	2	3	4
Номинальная массовая концентрация афлатоксина B1 в градуировочных растворах, мг/дм3	0,0002	0,0005	0,002	0,005
Содержание афлатоксина B1 в градуировочных растворах в пересчете на содержание афлатоксина B1 в пробе при массе навески 20 г и разбавлении экстракта 1:1, мкг/кг	2,0	5,0	20,0	50,0
Номинальная массовая концентрация ДОН в градуировочных растворах, мг/дм3	0,0125	0,05	0,1	0,25
Содержание ДОН в градуировочных растворах в пересчете на содержание ДОН в пробе при массе навески 20 г и разбавлении экстракта 1:3, мкг/кг	250	1000	2000	5000
Номинальная массовая концентрация зеараленона в градуировочных растворах, мг/дм3	0,001	0,004	0,012	0,04
Содержание зеараленона в градуировочных растворах в пересчете на содержание зеараленона в пробе при массе навески 20 г и разбавлении экстракта 1:4, мкг/кг	25	100	300	1000
Номинальная массовая концентрация охратоксина A в градуировочных растворах, мг/дм3	0,0004	0,001	0,004	0,008
Содержание охратоксина A в градуировочных растворах в пересчете на содержание охратоксина A в пробе при массе навески 20 г, мкг/кг	2,0	5,0	20,0	40,0
Номинальная массовая концентрация T-2 токсина в градуировочных растворах, мг/дм3	0,004	0,01	0,03	0,1
Содержание T-2 токсина в градуировочных растворах в пересчете на содержание T-2 токсина в пробе при массе навески 20 г, мкг/кг	20,0	50,0	150,0	500,0
Номинальная массовая концентрация фумонизина B1 в градуировочных растворах, мг/дм3	0,0025	0,01	0,025	0,05
Содержание фумонизина в градуировочных растворах в пересчете на содержание фумонизина B1 в пробе при массе навески 20 г и разбавлении экстракта 1:19, мкг/кг	0,25	1,0	2,5	5,0

 

Действительное значение массовой концентрации микотоксина C_iгр, мг/дм³, в i-м градуировочном растворе вычисляют по формуле

 

, (А.1)

 

где C₀ - действительное значение массовой концентрации микотоксина в растворе, взятом для разбавления, мг/дм³;

V₀ - объем раствора микотоксина, взятый для разбавления, см³;

V_i - объем приготовленного градуировочного раствора, см³.

А.2 Приготовление основного и градуировочных растворов афлатоксина B₁

А.2.1 Приготовление основного раствора афлатоксина B₁ массовой концентрации 0,05 мг/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 0,5 см³ стандартного образца афлатоксина B₁ массовой концентрации 10 мкг/см³. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и еще раз перемешивают.

А.2.2 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B₁ N 4

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 5,0 см³ основного раствора афлатоксина B₁ (см. А.2.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации афлатоксина B₁ - 0,005 мг/дм³.

А.2.3 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B₁ N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 4,0 см³ основного раствора афлатоксина B₁ (см. А.2.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации афлатоксина B₁ - 0,002 мг/дм³

А.2.4 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B₁ N 2

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 5,0 см³ градуировочного раствора афлатоксина B₁ N 4 (см. А.2.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации афлатоксина B₁ - 0,0005 мг/дм³.

А.2.5 Приготовление градуировочного раствора афлатоксина B₁ N 1

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,5 см³ градуировочного раствора афлатоксина B₁ N 4 (см. А.2.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации афлатоксина B₁ - 0,0002 мг/дм³.

А.3 Приготовление основного и градуировочных растворов ДОН

А.3.1 Приготовление основного раствора ДОН массовой концентрации 2,0 мг/дм³

В мерную колбу вместимостью 25 см³ наливают около 10 см³ дистиллированной воды, вносят 2,5 см³ стандартного образца ДОН массовой концентрации 20 мкг/см³. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

А.3.2 Приготовление градуировочного раствора ДОН N 4

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ дистиллированной воды, вносят 6,3 см³ основного раствора ДОН (см. А.3.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Значение массовой концентрации ДОН - 0,25 мг/дм³.

А.3.3 Приготовление градуировочного раствора ДОН N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ дистиллированной воды, вносят 5,0 см³ основного раствора ДОН (см. А.3.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Значение массовой концентрации ДОН - 0,1 мг/дм³.

А.3.4 Приготовление градуировочного раствора ДОН N 2

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ дистиллированной воды, вносят 10,0 см³ градуировочного раствора ДОН N 4 (см. А.3.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Значение массовой концентрации ДОН - 0,05 мг/дм³.

А.3.5 Приготовление градуировочного раствора ДОН N 1

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ дистиллированной воды, вносят 2,5 см³ градуировочного раствора ДОН N 4 (см. А.3.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Значение массовой концентрации ДОН - 0,0125 мг/дм³.

А.4 Приготовление основного и градуировочных растворов зеараленона

А.4.1 Приготовление основного раствора зеараленона массовой концентрации 0,40 мг/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,0 см³ стандартного образца зеараленона массовой концентрации 20 мкг/см³. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

А.4.2 Приготовление градуировочного раствора зеараленона N 4

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 10,0 см³ основного раствора зеараленона (см. А.4.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации зеараленона - 0,04 мг/дм³.

А.4.3 Приготовление градуировочного раствора зеараленона N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 3,3 см³ основного раствора зеараленона (см. А.4.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации зеараленона - 0,012 мг/дм³.

А.4.4 Приготовление градуировочного раствора зеараленона N 2

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят пипеткой 10 см³ градуировочного раствора зеараленона N 4 (см. А.4.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации зеараленона - 0,004 мг/дм³.

А.4.5 Приготовление градуировочного раствора зеараленона N 1

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят пипеткой 2,5 см³ градуировочного раствора зеараленона N 4 (см. А.4.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации зеараленона - 0,001 мг/дм³.

А.5 Приготовление основного и градуировочных растворов охратоксина A

А.5.1 Приготовление основного раствора охратоксина A массовой концентрации 0,40 мг/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 0,80 см³ стандартного образца охратоксина A массовой концентрации 50 мкг/см³. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

А.5.2 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A N 4

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А, вносят 2,0 см³ основного раствора охратоксина A (см. А.5.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации охратоксина A - 0,008 мг/дм³.

А.5.3 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 1,0 см³ основного раствора охратоксина A (см. А.5.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации охратоксина A - 0,004 мг/дм³.

А.5.4 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A N 2

В мерную колбу вместимостью 25 см³ помещают около 10 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 6,25 см³ градуировочного раствора охратоксина A N 3 (см. А.5.3). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации охратоксина A - 0,001 мг/дм³.

А.5.5 Приготовление градуировочного раствора охратоксина A N 1

В мерную колбу вместимостью 25 см³ помещают около 10 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,5 см³ градуировочного раствора охратоксина A N 3 (см. А.5.3). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки растворителем А и перемешивают.

Значение массовой концентрации охратоксина A - 0,0004 мг/дм³.

А.6 Приготовление основного и градуировочных растворов фумонизина B₁

А.6.1 Приготовление основного раствора фумонизина B₁ массовой концентрации 1 мг/дм³

Основной раствор фумонизина B₁ массовой концентрации 10 мг/дм³ готовят в два этапа.

Готовят раствор фумонизина B₁ массовой концентрации 100 мг/дм³. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (10,0 +/- 0,5) мг фумонизина B₁, добавляют около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1). Содержимое колбы перемешивают до полного растворения фумонизина B₁, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Действительное значение массовой концентрации фумонизина B₁ C_ф, мг/дм³, в приготовленном растворе вычисляют по формуле

 

, (А.2)

 

где m_ф - масса навески фумонизина B₁, мг;

w_ф - массовая доля основного вещества, %;

10 - коэффициент согласования единиц измерения;

V_ф - объем приготовленного градуировочного раствора, см³.

Далее приготовленный раствор разбавляют в 100 раз. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают около 40 см³ раствора А, добавляют 1 см³ раствора фумонизина B₁ массовой концентрации 100 мг/дм³, перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и еще раз перемешивают.

А.6.2 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B₁ N 4

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,5 см³ основного раствора фумонизина B₁ (см. А.6.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации фумонизина B₁ - 0,05 мг/дм³.

А.6.3 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B₁ N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,5 см³ основного раствора фумонизина B₁ (см. А.6.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации фумонизина B₁ - 0,025 мг/дм³.

А.6.4 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B₁ N 2

В мерную колбу вместимостью 25 см³ помещают около 10 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 5,0 см³ градуировочного раствора фумонизина B₁ N 4 (см. А.6.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации фумонизина B₁ - 0,01 мг/дм³.

А.6.5 Приготовление градуировочного раствора фумонизина B₁ N 1

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ раствора А (см. 12.4.1), вносят 2,5 см³ градуировочного раствора фумонизина B₁ N 4 (см. А.6.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации фумонизина B₁ - 0,0025 мг/дм³.

А.7 Приготовление основного и градуировочных растворов T-2 токсина

А.7.1 Приготовление основного раствора T-2 токсина массовой концентрации 1,0 мг/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 1,0 см³ стандартного образца T-2 токсина массовой концентрации 100 мкг/см³. Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

А.7.2 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина N 4

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 20 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 5,0 см³ основного раствора T-2 токсина (см. А.7.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации T-2 токсина - 0,1 мг/дм³.

А.7.3 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают около 40 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 3,33 см³ основного раствора T-2 токсина (см. А.7.1). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации T-2 токсина - 0,03 мг/дм³.

А.7.4 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина N 2

В мерную колбу вместимостью 25 см³ помещают около 10 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,5 см³ градуировочного раствора T-2 токсина N 4 (см. А.7.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации T-2 токсина - 0,01 мг/дм³.

А.7.5 Приготовление градуировочного раствора T-2 токсина N 1

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают около 10 см³ раствора А (см. 11.4.1), вносят 2,0 см³ градуировочного раствора T-2 токсина N 4 (см. А.7.2). Содержимое колбы перемешивают, объем раствора в колбе доводят до метки раствором А и перемешивают.

Значение массовой концентрации T-2 токсина - 0,004 мг/дм³.