ГОСТ 34104-2017. Межгосударственный стандарт. Корма и кормовые добавки. Метод идентификации генетически модифицированных линий сои, кукурузы и рапса с использованием ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени

6 Сущность метода

 

6.1 Сущность метода идентификации ГМ линий сои, кукурузы и рапса методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (Real Time PCR) заключается в проведении двух независимых ПЦР в одной пробирке с использованием специфичных праймеров и зондов, меченных флуоресцентными красителями, с целью выявления участка видоспецифичной ДНК растений (сои, кукурузы или рапса) и части генно-инженерной конструкции, специфичной для генома тестируемой генетически модифицированной линии.

6.2 Метод состоит из следующих этапов:

- экстракция и очистка ДНК: на данном этапе осуществляется лизис клеток с последующей очисткой ДНК от балластных веществ (белков, полисахаридов и других соединений);

- ПЦР с использованием специфических праймеров и зондов, меченных флуоресцентным красителем. На данном этапе осуществляется накопление копий целевого участка ДНК и детекция ПЦР-продуктов в режиме "реального времени";

- анализ и интерпретация результатов происходит на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флюоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией на графике зависимости интенсивности флюоресценции от количества циклов, что соответствует значениям порогового цикла Ct.