ГОСТ 34104-2017. Межгосударственный стандарт. Корма и кормовые добавки. Метод идентификации генетически модифицированных линий сои, кукурузы и рапса с использованием ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени
5 Оборудование, материалы, реагенты
5.1 Общие требования к оборудованию - по ИСО/МЭК 17025.
5.2 При проведении испытаний применяют оборудование и материалы по ГОСТ 31719, с дополнением:
- бокс ламинарный, класс биологической безопасности II тип А2;
- термостат, обеспечивающий температуру нагрева до 100 °C;
- отсасыватель вакуумный медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости;
- центрифуга для микропробирок вместимостью 1,5 см3, со скоростью вращения не менее 12000 об/мин;
- миницентрифуги-встряхиватели с роторами для микропробирок вместимостью 0,2; 0,6 и 1,5 см3, со скоростью вращения не менее 2400 об/мин;
- микропробирки одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся вместимостью 1,5 см3;
- микропробирки одноразовые полипропиленовые вместимостью 0,2 см3;
- одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером объемом 10 мм3, 100 мм3, 200 мм3, 1000 мм3;
- ПЦР-бокс;
- прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени <*>;
--------------------------------
<*> Прибор для проведения ПЦР "Rotor-Gene" 2000/3000/6000 ("Corbett Research", Австралия), "Rotor Gene Q" ("Qiagen", Германия). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
- халаты медицинские по ГОСТ 24760 и ГОСТ 25194;
- холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678, обеспечивающий поддержание температуры от 2 °C до 8 °C, с морозильной камерой, обеспечивающей поддержание температуры не выше минус 16 °C.
Допускается использование другого оборудования, материалов с техническими характеристиками не ниже указанных.
Допускается использование роботизированных станций для пробоподготовки, выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и раскапывания готовой многокомпонентной смеси для ПЦР.
5.3 При проведении испытаний применяют реагенты для экстракции ДНК, реагенты, праймеры и зонды для проведения ПЦР и амплификации. Для экстракции ДНК допускается использовать готовые наборы <**>.
--------------------------------
<**> Примером могут служить наборы "ДНК-СОРБ-С" (ФГБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, форма 1 ref K1-6-50/ver. 05/08/16), "Сорб-ГМО-А" и "Сорб-ГМО-Б" (ЗАО "Синтол", каталожный номер GM-503). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
5.3.1 Реагенты:
а) набор реагентов для экстракции ДНК, включающий:
1) буфер для лизирующего реагента, содержащий хаотропный агент гуанидин хлорид;
2) лизирующий реагент, содержащий протеиназу К;
3) раствор для отмывки N 1 для очистки от клеточных белков, содержащий хаотропный агент гуанидин тиоцианат;
4) раствор для отмывки N 2 для очистки от солей, содержащий водный раствор изопропилового спирта;
5) сорбент (25%-ная взвесь частиц силикагеля SiO2 размером от 20 до 50 мкм в растворе Трис-HCl молярной концентрации 5 ммоль/дм3);
6) буфер для элюции ДНК (TE-буфер) - Трис-HCl молярной концентрации 10 ммоль/дм3; натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты молярной концентрации 1 ммоль/дм3;
б) вода деионизированная, класса чистоты I, свободная от рибонуклеаз, дезоксирибонуклеаз, неорганических и органических примесей с удельным сопротивлением не менее 18 Мом·см;
в) ПЦР-буфер с MgCl2;
г) смесь олигонуклеотидов (праймеры) по 5.3.2 или 5.3.3;
д) смесь олигонуклеотидов (зонды, меченные флуоресцентными красителями FAM и R6G) по 5.3.2 или 5.3.3;
е) раствор дезоксинуклеозидтрифосфатов (дНТФ), содержащий натриевые соли дНТФ со степенью очистки более 98% и концентрацией каждой 2 моль/дм3;
ж) термостабильная Taq-полимераза;
и) сертифицированные стандартные образцы ГМ линий сои, ГМ линий кукурузы или ГМ линий рапса <*>.
--------------------------------
<*> Сертифицированные стандартные образцы производства IRMM, Бельгия; AOCS, США (материалы, состоящие из высушенной гомогенизированной муки соевых бобов, рапса или кукурузы, включающих смеси ГМ и не ГМ растений соответствующих видов, содержащие от 0,1% до 100% генетически модифицированных материалов). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
Допускается использование других реагентов с техническими характеристиками не хуже указанных.
5.3.2 Для выявления фрагментов видоспецифичной ДНК растений допускается использование наборов реагентов (готовых тест-систем), содержащих праймеры, специфичные к ДНК определенного вида растений.
5.3.3 Допускается использование синтезированных олигонуклеотидных праймеров и зондов для идентификации ГМ линий сои, кукурузы и рапса. Список последовательностей всех используемых олигонуклеотидов приведен в таблицах 1 - 3, где указаны последовательности:
1) для прямых и обратных праймеров и зондов <**>, специфичных конкретной ГМ линии;
--------------------------------
<**> Маркировки в наименовании: "F" - прямой праймер, "R" - обратный праймер, "P" - зонд.
2) прямых и обратных праймеров и зондов, специфичных фрагменту генома растения (ген лектина для сои, ген зеина для кукурузы, ген круциферина A для рапса).
Таблица 1
Последовательности олигонуклеотидных праймеров и зондов
для идентификации ГМ линий сои
Линия ГМ сои | Последовательность | Наименование | 5'-3' последовательность |
40-3-2 | Целевая | 40-3-2F | GCCATGTTGTTAATTTGTGCCAT |
40-3-2R | GAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGAC | ||
40-3-2P | FAM-CTTGAAAGATCTGCTAGAGTCAGCTTGTCAGCG-BHQ1 | ||
Растительная | Lec40-3-2F | TCCACCCCCATCCACATTT | |
Lec40-3-2R | GGCATAGAAGGTGAAGTTGAAGGA | ||
Lec40-3-2P | R6G-AACCGGTAGCGTTGCCAGCTTCG-BHQ1 | ||
A5547-127 | Целевая | A5547F | GCTATTTGGTGGCATTTTTCCA |
A5547R | CACTGCGGCCAACTTACTTCT | ||
A5547P | FAM-CCGCAATGTCATACCGTCATCGTTGT-BHQ1 | ||
Растительная | LecA5547F | CTTTCTCGCACCAATTGACA | |
LecA5547R | TCAAACTCAACAGCGACGAC | ||
LecA5547P | R6G-CCACAAACACATGCAGGTTATCTTGG-BHQ1 | ||
A2704-12 | Целевая | A2704F | GCAAAAAAGCGGTTAGCTCCT |
A2704R | ATTCAGGCTGCGCAACTGTT | ||
A2704P | FAM-CGGTCCTCCGATCGCCCTTCC-BHQ1 | ||
Растительная | LecA2704F | CACCTTTCTCGCACCAATTGACA | |
LecA2704R | TCAAACTCAACAGCGACGAC | ||
LecA2704P | R6G-CCACAAACACATGCAGGTTATCTTGG-BHQ1 | ||
MON89788 | Целевая | MON89788F | TCCCGCTCTAGCGCTTCAAT |
MON89788R | TCCCGCTCTAGCGCTTCAA | ||
MON89788P | FAM-CTGAAGGCGGGAAACGACAATCTG-BHQ1 | ||
Растительная | LecMON89788F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
LecMON89788R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
LecMON89788P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
MON87701 | Целевая | MON87701F | TGGTGATATGAAGATACATGCTTAGCAT |
MON87701R | CGTTTCCCGCCTTCAGTTTAAA | ||
MON87701P | FAM-TCAGTGTTTGACACACACACTAAGCGTGCC-BHQ1 | ||
Растительная | Lec87701F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
Lec87701R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
Lec87701P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
BPS-CV127-9 | Целевая | BPSF | AACAGAAGTTTCCGTTGAGCTTTAAGAC |
BPSR | CATTCGTAGCTCGGATCGTGTAC | ||
BPSP | FAM-TTTGGGGAAGCTGTCCCATGCCC-BHQ1 | ||
Растительная | LecBPSF | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
LecBPSR | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
LecBPSP | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
SYHTOH2 | Целевая | SyhF | GGGAATTGGGTACCATGCC |
SyhR | TGTGTGCCATTGGTTTAGGGT | ||
SyhP | FAM-CCAGCATGGCCGTATCCGCAA-BHQ1 | ||
Растительная | LecSyhF | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
LecSyhR | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
LecSyhP | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
FG72 | Целевая | FG72F | AGATTTGATCGGGCTGCAGG |
FG72R | GCACGTATTGATGACCGCATTA | ||
FG72P | FAM-AATGTGGTTCATCCGTCTTTTTTG-BHQ1 | ||
Растительная | LecFG72F | CTTTCTCGCACCAATTGACA | |
LecFG72R | TCAAACTCAACAGCGACGAC | ||
LecFG72P | R6G-CCACAAACACATGCAGGTTATCTTGG-BHQ1 | ||
DP-305423 | Целевая | 305423F | CGTGTTCTCTTTTTGGCTAGC |
305423R | GTGACCAATGAATACATAACACAAACTA | ||
305423P | FAM-TGACACAAATGATTTTCATACAAAAGTCGAGA-BHQ1 | ||
Растительная | Lec305423F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
Lec305423R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
Lec305423P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
DP-356043 | Целевая | 356043F | GTCGAATAGGCTAGGTTTACGAAAAA |
356043R | TTTGATATTCTTGGAGTAGACGAGAGTGT | ||
356043P | FAM-CTCTAGAGATCCGTCAACATGGTGGAGCAC-BHQ1 | ||
Растительная | Lec356043F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
Lec356043R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
Lec356043P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
MON87705 | Целевая | Mon87705F | TTCCCGGACATGAAGCCATTTAC |
Mon87705R | ACAACGGTGCCTTGGCCCAAAG | ||
Mon87705P | FAM-AAGAGACTCAGGGTGTTGTTATCACTGCGG-BHQ1 | ||
Растительная | LecMon87705F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
LecMon87705R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
LecMon87705P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
MON87708 | Целевая | Mon87708F | TCATACTCATTGCTGATCCATGTAG |
Mon87708R | AGAACAAATTAACGAAAAGACAGAACG | ||
Mon87708P | FAM-TCCCGGACTTTAGCTCAAAATGCATGTA-BHQ1 | ||
Растительная | LecMon87708F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
LecMon87708R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
LecMon87708P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
MON87769 | Целевая | Mon87769F | CATACTCATTGCTGATCCATGTAGATT |
Mon87769R | GCAAGTTGCTCGTGAAGTTTTG | ||
Mon87769P | FAM-CCCGGACATGAAGCCATTTACAATTGAC-BHQ1 | ||
Растительная | LecMon87769F | CCAGCTTCGCCGCTTCCTTC | |
LecMon87769R | GAAGGCAAGCCCATCTGCAAGCC | ||
LecMon87769P | R6G-CTTCACCTTCTATGCCCCTGACAC-BHQ1 | ||
DAS-44406 | Целевая | DAS-44406F | TTA TTG TTC TTG TTG TTT CCT CTT TAG G |
DAS-44406R | CCT CAA TTG CGA GCT TTC TAA TTT | ||
DAS-44406P | FAM- ATT CGG ACC TCC ATG ATG ACC TTA CCG TT- BHQ1 | ||
Растительная | LecDAS-44406F | CCA GCT TCG CCG CTT CCT TC | |
LecDAS-44406R | GAA GGC AAG CCC ATC TGC AAG CC | ||
LecDAS-44406P | FAM- CTT CAC CTT CTA TGC CCC TGA CAC- BHQ1 | ||
DAS-81419 | Целевая | DAS 81419F | TCT AGC CTA TAT TTA GCA CTT GAT ATT CAT |
DAS 81419R | GCT TCA AGA TCC CAA CTT GCG | ||
DAS 81419P | FAM-ATC AAC AGG CAC CGA TGC GCA CCG- BHQ1 | ||
Растительная | Lec DAS 81419F | CCA GCT TCG CCG CTT CCT TC | |
LecDAS 81419R | GAA GGC AAG CCC ATC TGC AAG CC | ||
LecDAS 81419P | FAM-CTT CAC CTT CTA TGC CCC TGA CAC- BHQ1 | ||
DAS-68416 | Целевая | DAS 68416F | GTA CAT TAA AAA CGT CCG CAA TGT GT |
DAS 68416R | GTT TAA GAA TTA GTT CTT ACA GTT TAT TGT TAG | ||
DAS 68416P | FAM-TTA AGT TGTCTA AGC GTC AAT A-MGBNFQ | ||
Растительная | Lec DAS 68416F | CCA GCT TCG CCG CTT CCT TC | |
LecDAS 68416R | GAA GGC AAG CCC ATC TGC AAG CC | ||
LecDAS 68416P | FAM-CTT CAC CTT CTA TGC CCC TGA CAC- BHQ1 |
Таблица 2
Последовательности олигонуклеотидных праймеров и зондов
для идентификации ГМ линий кукурузы
Линия ГМ кукурузы | Последовательность | Наименование | 5'-3' последовательность |
GA21 | Целевая | GA21 F | CTT ATC GTT ATG CTA TTT GCA ACT TTA GA |
GA21 R | TGG CTC GCG ATC CTC CT | ||
GA21 P | FAM- CAT ATA CTA ACT CAT ATC TCT TTC TCA ACA GCA GGT GGG T -BHQ1 | ||
Растительная | Adh GA21 F | CCA GCC TCA TGG CCA AAG | |
Adh GA21 R | CCT TCT TGG CGG CTT ATC TG | ||
Adh GA21 P | R6G- CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT - BHQ1 | ||
MON810 | Целевая | Mon810F | TCG AAG GAC GAA GGA CTC TAA CGT |
Mon810 R | GCC ACC TTC CTT TTC CAC TAT CTT | ||
Mon810 P | FAM- AAC ATC CTT TGC CAT TGC CCA GC -BHQ1 | ||
Растительная | Hmg Mon810 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg Mon810 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg Mon810 P | R6G- CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA -BHQ1 | ||
MON89034 | Целевая | Mon89034 F | TTC TCC ATA TTG ACC ATC ATA CTC ATT |
Mon89034 R | CGG TAT CTA TAA TAC CGT GGT TTT TAA A | ||
Mon89034 P | FAM-ATCCCCGGAAATTATGTT-MGBNFQ | ||
Растительная | Hmg Mon89034 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg Mon89034 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg Mon89034 P | R6G- CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA -BHQ1 | ||
NK603 | Целевая | NK603 F | ATG AAT GAC CTC GAG TAA GCT TGT TAA |
NK603 R | AAG AGA TAA CAG GAT CCA CTC AAA CAC T | ||
NK603 P | FAM- TGG TAC CAC GCG ACA CAC TTC CAC TC -BHQ1 | ||
Растительная | Agh NK603 F | CCA GCC TCA TGG CCA AAG | |
Agh NK603 R | CCT TCT TGG CGG CTT ATC TG | ||
Agh NK603 P | R6G- CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT -BHQ1 | ||
Bt11 | Целевая | Bt11 F | GCG GAA CCC CTA TTT GTT TA |
Bt11 R | TCC AAG AAT CCC TOO ATG AG | ||
Bt11 P | FAM- AAA TAC ATT CAA ATA TGT ATC CGC TCA -BHQ1 | ||
Растительная | Adh Bt11 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC | |
Adh Bt11 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh Bt11 P | R6G- AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA -BHQ1 | ||
T25 | Целевая | T25 F | ACA AGC GTG TCG TGC TCC AC |
T25 R | GAC ATG ATA CTC CTT CCA CCG | ||
T25 P | FAM- TCA TTG AGT CGT TCC GCC ATT GTC G -BHQ1 | ||
Растительная | Adh T25 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CCT | |
Adh T25 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh T25 P | R6G- AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA -BHQ1 | ||
MIR604 | Целевая | MIR604 F | GCG CAC GCA ATT CAA CAG |
MIR604 R | GGT CAT AAC GTG ACT CCC TTA ATT CT | ||
MIR604 P | FAM- AGGCGGGAAACGACAATCTGATCATG-BHQ1 | ||
Растительная | Adh MIR604 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC | |
Adh MIR604 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh MIR604 P | R6G- AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA -BHQ1 | ||
MON 88017 | Целевая | MON 88017 F | GAG CAG GAC CTG CAG AAG CT |
MON 88017 R | TCC GGA GTT GAC CAT CCA | ||
MON 88017 P | FAM- TCC CGC CTT CAG TTT AAA CAG AGT CGG GT - BHQ1 | ||
Растительная | Hmg MON 88017 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg MON 88017 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg MON 88017 P | R6G- CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA -BHQ1 | ||
3272 | Целевая | 3272 F | TCA TCA GAC CAG ATT CTC TTT TAT GG |
3272 R | CGT TTC CCG CCT TCA GTT TA | ||
3272 P | FAM- ACT GCT GAC GCG GCC AAA CAC TG -BHQ1 | ||
Растительная | Adh 3272 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC | |
Adh 3272 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh 3272 P | R6G- AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA -BHQ1 | ||
MIR162 | Целевая | MIR162 F | GCG CGG TGT CAT CTA TGT TAC TAG |
MIR162 R | TGC CTT ATC TGT TGC CTT CAG A | ||
MIR162 P | FAM- TCT AGA CAA TTC AGT ACA TTA AAA ACG TCC GCC A -BHQ1 | ||
Растительная | Adh MIR162 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC | |
Adh MIR162 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh MIR162 P | R6G- AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA -BHQ1 | ||
5307 | Целевая | 5307 F | CAT GGC CGT ATC CGC AAT GTG |
5307 R | TGC ACC CTT TGC CAG TGG | ||
5307 P | FAM-ACC ACA ATA TAC CCT CTT CCC TGG GCC AG-BHQ1 | ||
Растительная | Adh 5307 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC | |
Adh 5307 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh 5307 P | R6G -AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-BHQ1 | ||
Bt176 | Целевая | Bt176 F | GGC CGT GAA CGA GCT GTT |
Bt176 R | GGG AAG AAG CCT ACA TGT TTT CTA A | ||
Bt176 P | FAM-AGC AAC CAG ATC GGC CGA CAC C-BHQ1 | ||
Растительная | Adh Bt176 F | CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC | |
Adh Bt176 R | CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC | ||
Adh Bt176 P | R6G-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-BHQ1 | ||
MON 98140 | Целевая | MON 98140 F | GTG TGT ATG TCT CTT TGC TTG GTC TT |
MON 98140 R | GAT TGT CGT TTC CCG CCT TC | ||
MON 98140 P | FAM-CTC TAT CGA TCC CCC TCT TTG ATA GTT TAA ACT-BHQ1 | ||
Растительная | Hmg 98140 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg 98140 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg 98140 P | R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1 | ||
MON87460 | Целевая | Mon87460 F | CAC GTT GAA GGA AAA TGG ATT G |
Mon87460 R | TCG CGA TCC TCC TCA AAG AC | ||
Mon87460 P | FAM-AGG GAG TAT GTA GAT AAA TTT TCA AAG CGT TAG ACG GC-BHQ1 | ||
Растительная | Hmg Mon87460 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg Mon87460 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg Mon87460 P | R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1 | ||
MON863 | Целевая | Mon863 F | GTA GGA TCG GAA AGC TTG GTA C |
Mon863 R | TGT TAC GGC CTA AAT GCT GAA CT | ||
Mon863 P | FAM-TGA ACA CCC ATC CGA ACA AGT AGG GTC A-BHQ1 | ||
Растительная | Adh Mon863F | CCA GCC TCA TGG CCA AAG | |
Adh Mon863 R | CCT TCT TGG CGG CTT ATC TG | ||
Adh Mon863 P | R6G-CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT-BHQ1 | ||
TC1507 | Целевая | TC1507 F | TAG TCT TCG GCC AGA ATG G |
TC1507 R | CTT TGC CAA GAT CAA GCG | ||
TC1507 P | FAM-TAA CTC AAG GCC CTC ACT CCG-BHQ1 | ||
Растительная | Hmg TC1507 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg TC1507 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg TC1507 P | R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1 | ||
59122 | Целевая | 59122 F | GGGATAAGCAAGTAAAAGCGCTC |
59122 R | CCTTAATTCTCCGCTCATGATCAG | ||
59122 P | FAM-TTTAAACTGAAGGCGGGAAACGACAA-BHQ1 | ||
Растительная | Hmg 59122 F | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | |
Hmg 59122 R | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | ||
Hmg 59122 P | R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1 | ||
LY038 | Целевая | LY038 F | TGG GTT CAG TCT GCG AAT GTT |
LY038 R | AGG AAT TCG ATA TCA AGC TTA TCG A | ||
LY038 P | FAM-CGA GCG GAG TTT ATG GGT CGA CGG-BHQ1 | ||
Растительная | Hmg LY038 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg LY038 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg LY038 P | R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1 | ||
DAS-40278-9 | Целевая | DAS40278 F | CAC GAA CCA TTG AGT TAC AAT C |
DAS40278 R | TGG TTC ATT GTA TTC TGG CTT TG | ||
DAS40278 P | FAM-CGT AGC TAA CCT TCA TTG TAT TCC G-BHQ1 | ||
Растительная | Hmg 40278 F | TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA | |
Hmg 40278 R | GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T | ||
Hmg 40278 P | R6G-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-BHQ1 |
Таблица 3
Последовательности олигонуклеотидных праймеров и зондов
для идентификации ГМ линий рапса
Линия ГМ рапса | Последовательность | Наименование | 5'-3' последовательность |
GT73 | Целевая | RT73-F | CCATATTGACCATCATACTCATTGCT |
RF3-R | GCTTATACGAAGGCAAGAAAAGGA | ||
RT73-Z | FAM-TTCCCGGACATGAAGATCATCCTCCTT-BHQ1 | ||
GT73 | Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT |
Rape-cruA-R | CCGTCGTTGTAGAACCATTGG | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
MON88302 | Целевая | MON88302-F | TCCTTGAACCTTATTTTATAGTGCACA |
MON88302-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
MON88302-Z | FAM-TAGTCATCATGTTGTACCACTTCAAACACT-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | CCGTCGTTGTAGAACCATTGG | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
MS1 | Целевая | Ms1-F | ACGCTGCGGACATCTACATT |
MS1-R | CTAGATCGGAAGCTGAAGATGG | ||
MS1-Z | FAM-CTCATTGCTGATCCACCTAGCCGACTT-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
MS8 | Целевая | MS8-F | GTTAGAAAAAGTAAACAATTAATATAGCCGG |
MS8-R | GGAGGGTGTTTTTGGTTATC | ||
MS8-Z | FAM-AATATAATCGACGGATCCCCGGGAATTC-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
T45 | Целевая | T45-F | CAATGGACACATGAATTATGC |
T45-R | GACTCTGTATGAACTGTTCGC | ||
T45-Z | FAM-TAGAGGACCTAACAGAACTCGCCGT-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
RF1 | Целевая | RF1-F | CTAAGGGAGGTCAAGATGTAGC |
RF1-R | CGGGCCTAACTTTTGGTGTG | ||
RF1-Z | FAM-CTCATCATCCTCACCCAGTCAGCATCA-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
RF2 | Целевая | RF2-F | GGGTGAGACAATATATCGACG |
RF2-R | GGGCATCGCACCGGTGAG | ||
RF2-Z | FAM-CACCGGCCAAATTCGCTCTTAGCCGT-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
RF3 | Целевая | RF3-F | CATAAAGGAAGATGGAGACTTGAG |
RF3-R | AGCATTTAGCATGTACCATCAGACA | ||
RF3-Z | FAM-CGCACGCTTATCGACCATAAGCCCA-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 | ||
Topas 19/2 | Целевая | TOPAS19/2-F | GTTGCGGTTCTGTCAGTTCC |
TOPAS19/2-R | CGACCGGCGCTGATATATGA | ||
TOPAS19/2-Z | FAM-TCCCGCGTCATCGGCGG-BHQ1 | ||
Растительная | Rape-cruA-F | GGCCAGGGTTTCCGTGAT | |
Rape-cruA-R | TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA | ||
Rape-cruA-Z | R6G-AGTCCTTATGTGCTCCACTTTCTGGTGCA-BHQ1 |
Подписаться на обновления