ГОСТ Р 57124-2016. Национальный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли холина хлорида методом капиллярного электрофореза

8.6 Градуировка прибора и контроль стабильности градуировочной характеристики

8.6.1 Градуировка прибора

Перед измерением все растворы центрифугируют в течение 5 мин со скоростью вращения 5000 об/мин.

Непосредственно перед проведением измерений готовят капилляр в соответствии с 8.3.2. Между анализами капилляр промывают по 8.3.3.

Через 5 - 7 вводов раствора пробирки на входе и выходе необходимо заново заполнять другими порциями фонового электролита.

Для проведения градуировки прибора регистрируют электрофореграммы градуировочных растворов, приготовленных по 8.5.2 - 8.5.4, в условиях, указанных в таблице 1. При наличии технической возможности изменения длины волны детектирования ее выбирают в области 250 - 280 нм таким образом, чтобы высота пика холина хлорида в градуировочных растворах была максимальной.

Таблица 1

Условия проведения измерений

Наименование параметра	Значение параметра
Длина волны, нм	250 - 280 (254 <*>)
Температура, °C	40
Ввод пробы гидродинамический, мбар·с	От 150 до 300
Напряжение, кВ	От 15 до 25
<*> При использовании детектора, работающего на постоянной длине волны 254 нм.

Выбранные параметры анализа фиксируют и используют для записи электрофореграмм градуировочных, контрольных растворов и анализируемых растворов проб.

Диапазон линейности градуировочной характеристики для холина хлорида составляет от 1,0 до 100 мг/дм³.

Примечание - Допускается использование иных по количественному составу градуировочных и контрольных растворов, содержащих холина хлорид в концентрациях, соответствующих диапазону линейности градуировочной характеристики.

Пример электрофореграммы градуировочного раствора приведен в приложении А.

На полученной электрофореграмме проверяют правильность автоматической разметки пиков и, если необходимо, корректируют ее.

Далее обрабатывают электрофореграмму согласно процедуре градуировки в соответствии с руководством пользователя программного обеспечения, используемого для сбора и обработки данных, и устанавливают градуировочную характеристику в виде зависимости площади пика от массовой концентрации холина хлорида.

Градуировочная характеристика признается приемлемой при выполнении следующих условий:

- значение коэффициента корреляции, рассчитанное программой, более 0,99;

- отклонение в каждой точке градуировочной характеристики не превышает 5%.

Допускается использовать дополнительные критерии приемлемости градуировочных характеристик в соответствии с рекомендациями разработчиков программного обеспечения.

При несоблюдении указанных требований находят причины несоответствий и устраняют их, после чего градуировку прибора проводят повторно.

При замене капилляра после проведения ремонта прибора, изменении одного из параметров проведения измерений (см. таблицу 1), а также получении неудовлетворительных результатов контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 8.6.2) градуировку прибора проводят заново.

8.6.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводится в начале рабочего дня перед измерениями.

Для контроля стабильности градуировочной характеристики используют контрольный раствор (см. 8.5.5), который анализируют не менее двух раз в условиях, приведенных в таблице 1.

На полученных электрофореграммах проводят автоматическую идентификацию компонентов, установив ширину окна идентификации 5%. При необходимости вносят программную коррекцию номера пика или времени миграции.

При помощи программного обеспечения для каждого ввода контрольного раствора вычисляют массовую концентрацию холина хлорида (C_{к, 1}, C_{к, 2}), используя действующую на данный момент градуировочную характеристику, установленную по 8.6.2.

Градуировочная характеристика признается стабильной, если для каждого ввода (i = 1, 2) контрольного раствора выполняется неравенство:

|C_{к, i} - C_к| <= 0,01·G·C_к, (6)

где C_{к, i} - массовая концентрация холина хлорида в контрольном растворе, мг/дм³;

C_к - фактическое значение массовой концентрации холина хлорида в контрольном растворе, мг/дм³;

0,01 - коэффициент пересчета;

G - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, %.

Во всем диапазоне градуировочной характеристики значение G принимают равным 7%.

При невыполнении условия по формуле (6) капилляр промывают по 8.3.3, заново анализируют контрольный раствор еще два раза. При повторных отклонениях, превышающих указанные нормативы, прибор градуируют заново.