ГОСТ ISO 13366-1-2014. Межгосударственный стандарт. Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа (контрольный метод)

4. Реактивы

Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет других указаний, дистиллированную или деминерализованную воду или воду, эквивалентную по чистоте.

4.1. Растворы красителей

Предупреждение - Тетрахлорэтан - яд. Этидиум бромид - мутагенное вещество. В случае проливания необходимо немедленно принять меры по обезвреживанию. Приготовление и применение красящих растворов необходимо проводить в вытяжном шкафу, используя средства индивидуальной защиты.

4.1.1 Модифицированный окрашивающий раствор Newman-Lampert (модификация Lewowitz-Weber)

4.1.1.1 Состав

Этанол с объемной долей спирта 95%, см³	54,0
Тетрахлорэтан, см³	40,0
Метиленовый синий, г	0,6
Ледяная уксусная кислота, см³	6,0
Примечание - Допускается применять ксилол в том же объеме, какой указан для тетрахлорэтана.

4.1.1.2 Приготовление

В колбе смешивают этанол и тетрахлорэтан, укупоривают пробкой. Смесь нагревают на водяной бане (см. 5.1) до температуры 65 °C. Добавляют метиленовый голубой в вытяжном шкафу и тщательно перемешивают. Раствор охлаждают в холодильнике до 4 °C.

Затем добавляют ледяную уксусную кислоту и вновь тщательно перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтр (см. 5.2) в герметичную колбу на хранение.

Перед использованием окрашивающий раствор Newman-Lampert снова фильтруют.

4.1.2 Окрашивающий раствор бромида этидия

4.1.2.1 Основной окрашивающий раствор

4.1.2.1.1 Состав

Бромид этидия, г	0,25
Деминерализованная вода, см³	100

4.1.2.1.2 Приготовление основного окрашивающего раствора

Бромид этидия растворяют в деминерализованной воде, предварительно нагретой до 40 °C. Охлаждают раствор до комнатной температуры. Доводят до 100 см³ деминерализованной водой.

Основной окрашивающий раствор бромида этидия хранят не более двух месяцев в темном месте при температуре (2 +/- 2) °C.

4.1.2.2 Буферный раствор

4.1.2.2.1 Состав

Гидрофталат калия, г	0,51
Гидроксид калия, г	0,162
Деминерализованная вода, см³	100

4.1.2.2.2 Приготовление буферного раствора

Гидрофталат калия и гидроксид калия растворяют раздельно в деминерализованной воде.

Буферный раствор хранят в темном месте при температуре (2 +/- 2) °C не более 2 мес.

4.1.2.3 Рабочий окрашивающий раствор бромида этидия

4.1.2.3.1 Компоненты

Красящий основной раствор бромида этидия (см. 4.1.2.1), см³	2
Буферный раствор (см. 4.1.2.2), см³	8
Triton X-100, см³	0,1
Деминерализованная вода, см³	90
Примечание - Высокая температура может привести к снижению окрашивающей способности бромистого этидия.

4.1.2.3.2 Приготовление рабочего окрашивающего раствора бромида этидия

Добавляют последовательно основной окрашивающий раствор бромида этидия, буферный раствор и Triton X-100 в деминерализованную воду, тщательно перемешивают.

Свежий рабочий окрашивающий раствор бромида этидия готовят непосредственно перед использованием.