ГОСТ ISO 13366-1-2014. Межгосударственный стандарт. Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа (контрольный метод)

8. Проведение определения

 

Для каждой анализируемой пробы приготовляют как минимум два мазка (см. 8.1) и отбирают лучший из них (например, мазок, не поврежденный в процессе окрашивания). Погружают предметные стекла (см. 5.6) в этанол (95% по объему). Стерилизуют пламенем и охлаждают.

8.1. Приготовление мазка и окрашивание

Приготовление мазка и окрашивание проводят в соответствии с 8.1.1 или 8.1.2.

Примечание - Окрашивание мазка козьего молока приведено в приложении B.

 

8.1.1 Приготовление мазка и окрашивание окрашивающим раствором Newman-Lampert

Микрошприцем (см. 5.4) отбирают 0,01 см³ анализируемой пробы (разведенной соответствующим образом) (см. 7.2). Промывают микрошприц анализируемой пробой. При необходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала с анализируемой пробой.

Пробу помещают на чистое предметное стекло площадью 1 см² (см. 5.6). Используя иглу, равномерно распределяют анализируемую пробу на всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы площадь, прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсушивают при комнатной температуре до состояния полной сухости.

Погружают высушенный на предметном стекле мазок в модифицированный окрашивающий раствор Newman-Lampert (см. 4.1.1) не менее чем на 15 мин. Мазок высушивают при комнатной температуре.

Затем мазок осторожно промывают водопроводной водой для удаления излишков краски. Опять высушивают и хранят, защищая от пыли.

8.1.2 Окрашивание с использованием окрашивающего раствора этидиум бромида и приготовление мазка

Смешивают 1 см³ подготовленной анализируемой пробы (см. 7.2) с 1 см³ окрашивающего рабочего раствора бромида этидия (см. 4.1.2.3) в пробирке. Смесь хранят в защищенном от света месте. Нагревают пробирку на водяной бане (см. 5.1) при температуре 50 °C в течение 3 мин. Охлаждают до комнатной температуры.

При помощи микрошприца (см. 5.4) отбирают 0,01 см³ смеси. Микрошприц промывают смесью. При необходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала со смесью.

Помещают смесь на чистое предметное стекло площадью 1 см² (см. 5.6). При помощи иглы равномерно распределяют анализируемую пробу по всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы площадь, прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсушивают при комнатной температуре до состояния полной сухости.