ГОСТ ISO 18416-2013. Межгосударственный стандарт. Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Обнаружение Candida albicans

11. Нейтрализация антимикробных свойств продукции

 

11.1 Общие положения

Описанные требования подтверждают, что микроорганизм Candida albicans может расти в условиях проведения анализа.

11.2 Приготовление инокулята (посевного материала)

Перед проведением испытаний засевают поверхность среды, содержащей соевый и казеиновый гидролизаты (SCDA) или декстрозный агар Сабуро (SDA), штаммом Candida albicans. Инкубируют чашки при температуре (32,5 +/- 2,5) °C в течение 18 - 24 ч.

Стерильной петлей штриховыми движениями снимают с поверхности среды выросшие колонии и ресуспендируют в разбавителе для приготовления калиброванной суспензии с концентрацией клеток 1·106 КОЕ/см³ [количество клеток можно измерить, используя спектрофотометр, см. ISO 21148 (приложение С)].

Калиброванную суспензию и ее разведения используют в течение 2 ч.

11.3 Валидация метода обнаружения

11.3.1 Метод

11.3.1.1 В пробирках, содержащих по 9 см³ разбавителя, готовят разведения калиброванной суспензии, чтобы в конечном счете получить концентрацию микроорганизмов, равную 100 - 500 КОЕ/см³. Для подсчета окончательного количества жизнеспособных микроорганизмов в разведенной калиброванной суспензии вносят 1 см³ суспензии в чашку Петри и заливают 15 - 20 см³ расплавленной агаризованной среды. Температура расплавленной среды поддерживается с помощью водяной бани на уровне не более 48 °C. Дают среде в чашках застыть, а затем инкубируют при температуре (32,5 +/- 2,5) °C в течение 20 - 24 ч.

11.3.1.2 Параллельно готовят две (две повторности) исходные суспензии пробы в пробирке или колбе, соблюдая выбранные для анализа условия (не менее 1 г или 1 см³ испытуемой продукции и определенный объем бульона для обогащения). Если используют метод мембранной фильтрации, то фильтруют в двух повторностях не менее 1 см³ испытуемой продукции и переносят каждый мембранный фильтр в пробирку или колбу, содержащую бульон для обогащения в условиях, выбранных для проведения испытаний.

11.3.1.3 Стерильно вносят 0,1 см³ разведенной калиброванной суспензии (11.3.1.1) тест-культуры Candida albicans в одну пробирку или колбу (валидационный тест). Перемешивают, затем инкубируют обе пробирки или колбы (валидационный тест и неконтаминированный контроль) при температуре (32,5 +/- 2,5) °C в течение 20 - 24 ч.

11.3.1.4 Проводят выделение из каждой пробирки или колбы (валидационный тест и неконтаминированный контроль). Используя стерильную петлю, делают высев методом истощающего штриха на поверхность декстрозной агаризованной среды Сабуро с хлорамфениколом, разлитой в чашки Петри (диаметр от 85 до 100 мм) в количестве приблизительно 15 - 20 см³. Инкубируют при температуре (32,5 +/- 2,5) °C в течение 20 - 24 ч.

11.3.2 Обработка результатов валидации

Проверяют, что разведенная калиброванная суспензия дрожжей содержит от 100 до 500 КОЕ/см³ микроорганизмов.

Нейтрализация и метод обнаружения являются достоверными, когда ростовые характеристики Candida albicans наблюдаются у микроорганизмов, выросших на чашке с высевом из пробирки или колбы с валидационным тестом (контаминированной калиброванной суспензией) и отсутствует рост на чашке с высевом из пробирки или колбы с неконтаминированным контролем.

Когда обнаружен рост на чашке с высевом из пробирки или колбы с неконтаминированным контролем (контаминированная продукция), нейтрализация и метод обнаружения являются достоверными, если бактерии вида Candida albicans выделены на чашке Петри с высевом из пробирки или колбы с валидационным тестом.

Отсутствие роста на чашках Петри с высевом из пробирки или колбы с валидационным тестом указывает на то, что антимикробная активность все еще не нейтрализована и требуется изменение условий метода путем увеличения объема питательного бульона, при этом количество продукции остается тем же, или путем добавления большего количества инактивирующего вещества в бульон для обогащения, или путем подбора условий, которые позволят выделить Candida albicans.

Если, несмотря на введение подходящих инактивирующих веществ и значительное увеличение объема бульона, все еще невозможно выделить жизнеспособные культуры, как описано выше, это указывает на малую вероятность контаминации продукции бактериями вида Candida albicans.