ГОСТ 33463.6-2016. Межгосударственный стандарт. Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения

8.7. Определение патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae

8.7.1 Метод 1. Посев проб воды для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, в том числе сальмонелл

Для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae исследуют 1000 см³ воды, засевая по 500 см³ в две среды накопления: магниевую среду - для определения сальмонелл (см. Д.12 приложения Д) и селенитовый бульон - для определения патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, в том числе сальмонелл (см. Д.15. приложения Д) или другие апробированные и разрешенные к применению для этих целей среды накопления.

При посеве пробы воды в магниевую среду в стерильную емкость с навесками по Д.12 (приложение Д) прибавляют 500 см³ исследуемой пробы воды, после чего добавляют дрожжевой экстракт и бриллиантовый зеленый.

При посеве пробы воды в селенитовый бульон для определения патогенных энтеробактерий к 500 см³ исследуемой воды добавляют 500 см³ селенитового бульона двойной концентрации (см. Д.15. приложения Д).

8.7.2 Метод 2. Посев проб воды для определения сальмонелл методом мембранной фильтрации

Для посева двух объемов по 500 см³ отбирают 1000 см³ воды. Каждый объем профильтровывают через один или несколько мембранных фильтров. Затем эти фильтры помещают в любые две из перечисленных сред накопления объемом 50 и 100 см³. При затрудненной фильтрации большого объема пробы следует на фильтр с диаметром пор 0,45 мкм наложить фильтр с большим диаметром пор для задержания взвешенных частиц с последующим помещением в питательную среду накопления обоих фильтров.

8.7.3 Проведение анализа

Посевы воды в средах накопления инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение промежутка времени от 18 до 20 ч. При отсутствии роста в течение 24 ч пробы инкубируют 48 ч. При обнаружении роста (помутнения среды) производят высев бактериологической петлей на две чашки с висмут-сульфитным агаром (см. Д.14 приложения Д) и две чашки Эндо (см. Д.4 приложения Д).

Рассев производят одним из методов получения изолированных колоний. Чашки Петри с посевами инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение промежутка времени от 18 до 24 ч.

На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл круглые, черные, с металлическим блеском, с сероватым металлическим ободком вокруг колоний, так называемое "зеркало", зеленые с темным центром и без него, вызывающие потемнение среды под колонией до черного цвета.

Выросшие на среде Эндо небольшие колонии бледно-розовые, прозрачные с ровными или неровными краями идентифицируют на принадлежность к патогенным энтеробактериям. В отличие от патогенных бактерий, E. coli и колиформные бактерии образуют круглые, выпуклые, гладкие, малинового цвета колонии с металлическим блеском и без него.

При обнаружении подозрительных на сальмонеллы (Shigella или др.) колонии отсевают по 4 - 5 каждого вида в пробирки с комбинированными средами для определения биохимических свойств, подтверждающих принадлежность к родам Salmonella (Shigella или др.) типа Клиглера или Олькеницкого.

Окончательное определение биохимических свойств проводят по тест-системам, серологических свойств сероваров - по инструкциям производителя сывороток, разрешенных к применению в соответствии с 8.1.6.