ГОСТ 33463.6-2016. Межгосударственный стандарт. Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения

8.4. Определение энтерококков

8.4.1 Определение энтерококков методом мембранной фильтрации

8.4.1.1 Фильтруют 100 см³ пробы воды через мембранные фильтры с соблюдением требований, представленных в приложении Е. После фильтрования фильтры переносят, не переворачивая, на плотную агаризованную среду энтерококкагара (см. Д.9.1 приложения Д) или агаризованную плотную азидную среду Сланеца-Бертли (см. Д.9.2 приложения Д) и добиваются полного прилегания его к среде без образования пузырьков воздуха. Чашки Петри с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение 24 - 48 ч.

При отсутствии роста колоний инкубацию посевов продолжают до 48 ч.

После инкубации посевов учитывают колонии, характерные для энтерококков - выпуклые, с ровными краями, темно-малиновые, розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным не четко оформленным центром и подсчитывают их число.

Очень мелкие (на пределе видимости невооруженным глазом), плоские разных оттенков, ярко-малиновые с четко выраженным малиновым центром и бесцветным ободком колонии не учитывают.

Регистрируют число колоний энтерококков или их отсутствие в журнале испытаний.

8.4.1.2 При необходимости подтверждают наличие энтерококков с помощью тест-систем для идентификации энтерококков (в соответствии с инструкцией производителя) или одним из следующих способов.

Пересевают по 2 - 3 колонии каждого типа:

- секторами на солевой агар с ТТХ (см. Д.9.3 приложения Д) и инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение 24 ч. Энтерококки на указанной среде дают равномерный нежный рост на протяжении всего штриха. Иные бактерии на этой подтверждающей среде не растут или растут на платформе штриха;

- мембранный фильтр с выросшими колониями стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят на поверхность желчь-эскулин-азидного агара, предварительно нагретого до 44 °C, и помещают в термостат на (44,0 +/- 0,5) °C (см. Д.9.4 приложения Д), инкубируют в течение 2 ч. В течение этого времени эскулин гидролизируется энтерококками с образованием характерных продуктов, что проявляется окрашиванием типичных для кишечных энтерококков колоний от коричневого до черного цвета.

8.4.1.3 Подсчитывают число колоний энтерококков на фильтрах, где выросло менее 50 - 70 колоний, суммируют и определяют по формуле

 

, (2)

 

где X - число КОЕ энтерококков в 100 см³ исследуемой воды;

a - число подсчитанных энтерококков в сумме;

V - объем воды, профильтрованный через фильтры, на которых велся учет.

В протоколе исследования выдают "Число КОЕ энтерококков в 100 см³ анализируемой пробы воды".

При отсутствии в пробе анализируемой воды энтерококков в протокол испытаний вносят текст: "Не обнаружено КОЕ энтерококков в 100 см³ пробы анализируемой воды".

8.4.2 Ускоренные методы выявления энтерококков с использованием готовых питательных сред на подложках

Подложку с питательной средой, разрешенной к применению в соответствии с 8.1.6, готовят к анализу в соответствии с технической документацией на подложку.

Пробы воды фильтруют в соответствии с приложением Е. Фильтры стерильным пинцетом накладывают на подложку и помещают в инкубатор или термостат.

Посевы инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение 18 - 24 ч.

Идентификацию энтерококков среди выросших колоний проводят по морфологии, цвету колоний в соответствии с технической документацией на подложку (в зависимости от используемой питательной среды).

Обработка по 8.2.1.3.

8.4.3 Сигнальный метод определения энтерококков

Навеску питательной среды для определения энтерококков вносят в 100 см³ исследуемой воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Посевы инкубируют в течение 18 - 24 ч при температуре (36 +/- 2) °C.

Примечание - Допускается в соответствии с прилагаемой инструкцией производителя инкубирование посевов при температуре от 20 °C до 25 °C в течение 48 ч.

 

После инкубации посевов проводят учет результатов, при этом считают, что:

- энтерококки отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение среды без изменения цвета;

- бактерии обнаружены, если среда приобрела цвет, описанный в инструкции производителя во всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды не должен измениться.