ГОСТ 33463.6-2016. Межгосударственный стандарт. Системы жизнеобеспечения на железнодорожном подвижном составе. Часть 6. Методы гигиенической оценки системы водоснабжения

8.2. Методы определения общего микробного числа

8.2.1 Определение общего числа микроорганизмов (ОМЧ), образующих колонии на питательном агаре

8.2.1.1 Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных и аэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре (36 +/- 2) °C в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

8.2.1.2 При выполнении анализа из каждой пробы воды делают посев не менее двух объемов по 1 см³ без разведения.

Посев воды проводят после тщательного перемешивания пробы. Посев производят, внося по 1 см³ воды из пробы в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Сразу после внесения воды в каждую чашку Петри наливают небольшое количество (от 8 до 10 см³ на одну чашку Петри диаметром 90 или 100 мм) расплавленного и остуженного до температуры в пределах от 45 °C до 48 °C питательного агара (не касаясь посевной пробы), предварительно фламбируя край емкости, в которой он находился. После внесения агара содержимое чашки Петри плавно перемешивают, равномерно распределяя его по дну чашки, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки, и помещают на горизонтальную поверхность.

Посев и заливку посевов питательным агаром проводят между пламенем двух горелок с целью обеспечения условий асептики.

После застывания агара чашки Петри с посевами переворачивают (вверх дном), помещают в термостат и инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение (24 +/- 4) ч.

После инкубации чашки Петри с посевами извлекают из термостата, подсчитывают все выросшие на чашках колонии микроорганизмов (X), видимые при увеличении в 2 раза, и регистрируют в журнале испытаний. Подсчет проводят только на тех чашках, на которых выросло не более 300 колоний.

Результат допускается представлять на основании подсчета колоний на одной чашке, если на другой чашке обнаружен ползучий рост колоний, или число колоний превышает 300.

Если на всех чашках имеет место рост расплывчатых колоний, который не распространился на всю поверхность чашки, подсчитывают колонии на секторе с изолированными колониями с последующим пересчетом на всю площадь чашки.

Если на чашке выросло более 300 изолированных колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают колонии на двух секторах, выбранных на участках чашки с максимальным и минимальным ростом и пересчитывают на всю площадь чашки.

В этих случаях в протоколе отмечают "Число КОЕ в 1 см³ ориентировочно".

Если подсчет колоний на чашках невозможен за счет сплошного роста изолированных колоний, в журнал испытаний вносят текст: "Сплошной рост". Если на всех засеянных чашках рост расплывчатых колоний бактерий распространился на всю поверхность чашки, то в журнал испытаний вносят текст: "Сливной рост".

Если ни на одной из засеянных чашек не выросло ни одной колонии, в протоколе исследований указывают - "КОЕ ОМЧ не обнаружено в 1 см³".

Примечание - Если рост колоний на чашках с посевами не обнаружен, то допустимо продолжить инкубацию посевов до 48 ч, после чего окончательно учесть результат.

 

8.2.1.3 Содержание микроорганизмов (X) в 1 см³ анализируемой пробы воды рассчитывают по формуле

 

, (1)

 

где N - число колоний, подсчитанных и зарегистрированных по 8.2.1.2;

V - объем воды, см³, использованный для посева на чашки Петри, на которых велся подсчет.

Результат округляют до целого числа и выражают числом колоний образующих единиц микроорганизмов в 1 см³ пробы воды.

8.2.2 Определение ОМЧ с использованием готовых к употреблению питательных подложек

Для определения ОМЧ анализируемую воду в объеме 1 см³ вносят на поверхность подложки (при использовании петрифильма в центр и аккуратно опускают верхнюю пленку). Посевы инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение 18 - 24 ч.

Подсчет колоний по 8.2.1.2.

8.2.3 Проведение посева проб воды на месте отбора проб с последующей доставкой в стационарную лабораторию

8.2.3.1 Посев проб воды на месте отбора для определения ОМЧ проводят в соответствии с 8.2.1.2.

Посевы помещают в переносной термостат или термоконтейнер с температурой внутри камеры не ниже 30 °C и доставляют для дальнейшего анализа в стационарную лабораторию в срок не более 24 ч.

В стационарной лаборатории посевы переносят в термостат при температуре (36 +/- 2) °C. Через 24 ч инкубации посевов проводят учет выросших колоний. При отсутствии роста колоний общее время инкубации посевов должно составлять 48 ч.

8.2.3.2 Подсчет и идентификацию обнаруженных микроорганизмов в посеве проб воды, учет, обработку проводят в стационарной лаборатории по 8.2.1.2, 8.2.1.3.

8.2.3.3 Доставка посевов проб воды в стационарную лабораторию должна сопровождаться передачей акта отбора проб воды и документа, включающего информацию о процедуре посева: условия посева (температура и влажность воздуха), дата и время посева, фамилию, имя и отчество лица, проводившего отбор и посев проб воды.