ГОСТ ISO/TS 17764-1-2015. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма. Определение содержания жирных кислот. Часть 1. Приготовление метиловых эфиров

5 Получение метиловых эфиров жирных кислот с шестью или более атомами углерода (BF₃ метод)

 

5.1 Сущность

Глицериды омыляют метанольным раствором гидроокиси натрия. Мыла преобразуются в метиловые эфиры путем взаимодействия с комплексом трехфтористый бор/метанол.

5.2 Реактивы

Все реактивы должны быть признанной аналитической степени чистоты.

5.2.1 Вода 3 степени чистоты по ISO 3696.

5.2.2 Гептадекановая кислота (внутренний стандарт), с содержанием основного вещества не менее 99%.

5.2.3 Гидроокись натрия, метанольный раствор, c(NaOH) ~= 0,5 моль/дм³

Растворяют 2 г гидроокиси натрия в 100 см³ метанола, содержащего не более 0,5% (массовая доля) воды. При длительном хранении раствора может образоваться небольшое количество белого осадка карбоната натрия, который не оказывает никакого влияния на приготовление метиловых эфиров.

Вместо гидроокиси натрия допускается использовать метанольный раствор гидроокиси калия с той же концентрацией.

5.2.4 Бор трехфтористый (BF₃), метанольный раствор с массовой долей BF₃ от 10% до 15%.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Трехфтористый бор является ядовитым. Рекомендуется использовать готовый раствор, который имеется в продаже.

Некоторые реактивы могут затруднять газохроматографический анализ метиловых эфиров. В частности, пик BF₃ может выходить в области выхода пиков метиловых эфиров жирных кислот с 20 и 22 атомами углерода. Рекомендуется проверить реактивы путем подготовки метилового эфира олеиновой кислоты с последующим газохроматографическим анализом, при этом используемые реактивы не должны приводить к наложению пиков.

5.2.5 н-гексан или н-гептан.

5.2.6 Хлорид натрия, насыщенный водный раствор.

5.2.7 Сульфат натрия безводный.

5.3 Оборудование

Используют обычное лабораторное оборудование, в частности:

5.3.1 Круглодонная колба вместимостью 50 см³ со шлифованным горлом и снабженная шлифованной стеклянной пробкой.

5.3.2 Стеклянные шарики или трубочки обезжиренные для равномерного кипения раствора.

5.3.3 Обратный холодильник с эффективной длиной от 20 до 30 см со шлифованным соединением, подходящим к колбе.

5.3.4 Градуированные пипетки вместимостью не менее 10 см³, оснащенные резиновой грушей, и автоматические пипетки.

5.3.5 Виалы с завинчивающимися крышками.

5.4 Проведение испытания

5.4.1 Общие рекомендации

Из-за токсических свойств трехфтористого бора, метилирование следует проводить под вытяжкой. Всю стеклянную посуду сразу после использования вымыть водой.

Если жирные кислоты содержат больше двух двойных связей, рекомендуется удалить воздух из колбы барботированием раствора азотом, который содержит менее 5 мг/кг кислорода, в течение нескольких минут, а затем поддерживать ток азота в верхней части холодильника в течение последующего омыления.

При подготовке сложных метиловых эфиров жирных кислот для газожидкостной хроматографии растворитель из раствора метиловых эфиров не удаляют.

5.4.2 Подготовка навески

Взвешивают с от 100,0 до 250,0 мг подготовленной анализируемой пробы (см. раздел 4) в круглодонную колбу (см. 5.3.1). В качестве внутреннего стандарта в колбу добавляют гептадекановую кислоту (см. 5.2.2) массой около 20% от массы навески и взвешенную с записью результата до первого десятичного знака. Взвешивают во вторую круглодонную колбу примерно такое же количество подготовленной анализируемой пробы.

Испытания проводят параллельно в двух колбах как описано далее.

Пробы масла или жира омыляют и метилируют в соответствии с 5.4.3 и 5.4.4.

Пробы, состоящие исключительно из свободных жирных кислот или мыла, метилируют в соответствии с 5.4.5.

Допускается использовать навеску менее 100 мг, если материала недостаточно. Предписываемые количества реактивов и растворителей должны быть пропорционально уменьшены.

5.4.3 Омыление

В каждую колбу с навеской добавляют 4 см³ метанольного раствора гидроокиси натрия (см. 5.2.3) и кипелки (см. 5.3.2). На колбу устанавливают холодильник (см. 5.3.4).

Кипятят с обратным холодильником до исчезновения капелек жира, а затем еще в течение 30 мин.

Если присутствуют какие-либо неомыляемые вещества, которые могут мешать анализу, раствор после омыления разбавляют водой, а затем экстрагируют диэтиловым эфиром, гексаном или петролейным эфиром. Экстракт отбрасывают. После подкисления оставшегося омыленного раствора, жирные кислоты разделяют и метилируют в соответствии с 5.4.5.

5.4.4 Получение метиловых эфиров из проб жира или масла

К кипящему раствору через верхнюю часть холодильника с помощью градуированной пипетки (см. 5.3.4) добавляют 5 см³ метанольного раствора трифторида бора (см. 5.2.4). Кипячение продолжают в течение 3 мин.

Процедуру продолжают по 5.4.6.

5.4.5 Подготовка метиловых эфиров, если проба содержит исключительно свободные жирные кислоты или соапстока

В колбу с помощью градуированной пипетки (см. 5.3.4) добавляют 5 см³ метанольного раствора трифторида бора (см. 5.2.4). На колбу устанавливают холодильник (см. 5.3.3) и кипятят в течение 3 мин.

5.4.6 Экстракция

Колбу снимают с источника нагревания. Через верхнюю часть холодильника добавляют от 1 до 3 см³ н-гексана (см. 5.2.5).

Примечание - Объем добавленного растворителя не имеет решающего значения.

 

Охлаждают до комнатной температуры. Удаляют холодильник и добавляют около 15 см³ насыщенного раствора хлорида натрия (см. 5.2.6).

Колбу закрывают пробкой и энергично встряхивают. Добавляют еще насыщенного раствора хлорида натрия (см. 5.2.6), чтобы довести уровень жидкости до горла колбы. Дают двум фазам разделиться. Переносят большую часть верхнего слоя с помощью пипетки в виалу (см. 5.3.5). Экстрагируют солевой раствор еще три раза порциями от 1 до 3 см³ н-гексана (см. 5.2.5) путем встряхивания и переноса верхнего слоя в виалу.

Далее в виалу добавляют небольшое количество безводного сульфата натрия (см. 5.2.7), чтобы удалить остатки воды из раствора.

Раствор готов для газохроматографического анализа. Массовая доля метиловых эфиров в экстракте составит около 3%, при массе навески от 100 до 250 мг.

Если для газохроматографического анализа используется холодный впрыск в колонку, то экстракт разбавляют. Для этого в мерную колбу вместимостью 25 см³ вносят пипеткой 0,25 см³ экстракта и н-гексаном (см. 5.2.5) доводят объем раствора до метки.