ГОСТ 33505-2015. Межгосударственный стандарт. Карантин растений. Методы выявления и идентификации потивируса шарки слив

8.2. Биологические методы выявления

8.2.1 Тест на древесных индикаторных растениях

8.2.1.1 Сущность теста

Сущность теста заключается в прививке исследуемого образца растения (черенка, почки или участка коры) на древесные индикаторные растения с целью последующего обнаружения специфических симптомов заражения потивирусом шарки слив.

8.2.1.2 Проведение теста

Семена персика (Prunus persica) высаживают в горшки в зимней теплице в феврале - марте, затем в возрасте 60 дней на полученные сеянцы прививают по два-три глазка или щитка коры от исследуемого образца, верхушку сеянца удаляют.

При отсутствии зимней теплицы тест проводят в полевых условиях, высаживая в марте - мае сеянцы персика, инокулированные в зимний период глазками или щитками коры исследуемого образца.

Повторность теста в полевых условиях - трехкратная, один сеянец персика оставляют неинокулированным в качестве контроля. Продолжительность теста - три года.

Одно-двухлетние индикаторные растения инокулируют методом массированного заражения, прививая по четыре - шесть глазков или щитков коры исследуемого образца.

Повторность тестов на сеянцах персика в теплице и одно-двухлетних индикаторных растениях пятикратная, один сеянец/индикаторное растение оставляют неинокулированным в качестве контроля. Продолжительность теста - один год.

Зараженность потивирусом шарки слив исследуемых образцов растений выявляют по наличию симптомов, представленных в таблице 1.

 

Таблица 1

 

Симптомы потивируса шарки слив на древесных

индикаторных растениях

 

Наименование растения	Симптомы
Сеянцы персика (Prunus persica) клонов Elberta и GF 305	Посветление жилок и деформация листьев
Войлочная вишня (Prunus tomentosa) клонов IR 473/1 или IR 474/1	Хлоротическая крапчатость, хлороз жилок, некротические пятна и деформация листьев
Слива Марьяне (Prunus marianna) гибрид GF 8.1 (Prunus cerasifera x Prunus munsoniana)	Диффузные хлоротические пятна на листьях
Слива терновая (Prunus insititia) клона St. Julien N 2	Хлоротические пятна и кольца на листьях
Слива домашняя (Prunus domestica) гибрид K4 (Kirke x Persikovaja)	Светло-зеленая крапчатость и некротические пятна на листьях, некрозы верхушек побегов, отмирание растений при заражении сильнопатогенными штаммами
Слива домашняя (Prunus domestica) сорта Pozegaca	Хлоротические кольца, полосы и пятна на листьях

 

8.2.2 Тест на травянистых индикаторных растениях

8.2.2.1 Сущность теста

Сущность теста заключается в приготовлении смеси исследуемого образца растения с экстрагирующим буферным раствором, инокуляции полученной смесью травянистых индикаторных растений с целью последующего обнаружения специфических симптомов заражения потивирусом шарки слив.

8.2.2.2 Подготовка проб

Исследуемый образец растения, отобранный по 7.2.1, массой 1 г гомогенизируют в пластиковом контейнере с 20 см³ экстрагирующего буферного раствора по 7.1.1.3 на гомогенизаторе в течение 2 - 5 мин или с помощью фарфоровой ступки и пестика до получения однородной суспензии.

8.2.2.3 Проведение теста

Подготовленную пробу растительного материала, полученную по 8.2.2.2, смешивают с одним из стабилизирующих растворов по 7.1.1 (фосфатным буферным раствором, раствором с ДИЕКА, дифенилдитиомочевиной и кофеином, раствором никотина или HEPES буферным раствором) в соотношении 1:3, растирают в фарфоровой ступке и образовавшимся соком натирают поверхность листьев травянистых индикаторных растений, предварительно опудренных карбидом кремния.

Примечание - Растворы и фарфоровую ступку перед растиранием охлаждают до температуры 3 °C.

 

При использовании раствора никотина в качестве стабилизирующего раствора место инокуляции промывают дистиллированной водой с целью предотвращения появления ожогов.

Повторность теста - пятикратная, одно индикаторное растение оставляют неинокулированным в качестве контроля. Продолжительность теста - 20 дней.

Зараженность потивирусом шарки слив исследуемых образцов растений выявляют по наличию симптомов, представленных в таблице 2.

 

Таблица 2

 

Симптомы потивируса шарки слив на травянистых

индикаторных растениях

 

Наименование растения	Симптомы
Марь вонючая (Chenopodium foetidum)	Хлоротические, хлоротически-некротические или некротические пятна (в зависимости от изолята вируса) на инокулированных листьях, отсутствие системного заражения
Табак Кливленда (Nicotiana clevelandii) или гибрид табака Кливленда и табака клейкого (Nicotiana clevelandii x Nicotiana glutinosa)	Хлоротические или некротические пятна на инокулированных листьях, системная хлоротическая крапчатость
Табак Бентхама (Nicotiana benthamiana)	Системные карликовость растений, хлоротическая мозаика с темно-зелеными участками ткани, деформации листьев
Никандра физалисовидная (Nicandra physalodes)	Темно-коричневые некротические пятна на инокулированных листьях
Горох посевной (Pisum sativum)	Системные светло-зеленая мозаика, хлоротическая крапчатость