ГОСТ 33505-2015. Межгосударственный стандарт. Карантин растений. Методы выявления и идентификации потивируса шарки слив

6. Средства измерений, аппаратура, реактивы,

посуда и материалы

6.1 Для отбора и хранения образцов по 7.2 используют:

- камеру холодильную диапазоном температур от 2 °C до 5 °C по ГОСТ 26678;

- спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300;

- хлорамин;

- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;

- пакеты из полимеров этилена, герметично закрывающиеся;

- пакеты из полимеров этилена, с отверстиями для доступа воздуха;

- секатор по ГОСТ 4153;

- скальпель медицинский по ГОСТ 21240.

6.2 Для проведения биологического теста на древесных индикаторных растениях по 8.2.1 используют:

- семена персика стратифицированные безвирусные клонов GF 305 или Elberta;

- растения индикаторные древесные: вишню войлочную (Prunus tomentosa) клонов IR 473/1 или IR 474/1 или сливу Марьяне (Prunus marianna) гибрид GF 8.1 (Prunus cerasifera x Prunus munsoniana), или сливу терновую (Prunus insititia) клона St. Julien N 2, или сливу домашнюю (Prunus domestica) гибрид K4 (Kirke x Persikovaja), или сливу домашнюю (Prunus domestica) сорта Pozegaca.

6.3 Для проведения биологического теста на травянистых индикаторных растениях по 8.2.2 используют:

- весы по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,0001 г;

- измельчитель лабораторный (гомогенизатор);

- измеритель pH диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH, имеющий минимальную чувствительность 0,1 ед. pH;

- камеру холодильную диапазоном температур от 2 °C до 5 °C по ГОСТ 26678;

- альбумин бычий сывороточный молекулярной массы 69000 г/моль, х.ч.;

- альбумин яичный, х.ч.;

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- ДИЕКА молекулярной массы 225,31 г/моль, х.ч.;

- дифенилдитиомочевина (N,N'-дифенилтиокарбамид) молекулярной массы 228,31 г/моль), х.ч.;

- калия гидроокись по ГОСТ 24363;

- калия дигидроортофосфат (калий фосфорнокислый однозамещенный) по ГОСТ 4198;

- калия дигидрофосфат (калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный) по ГОСТ 2493;

- калия хлорид (калий хлористый) по ГОСТ 4234;

- кислоту ортофосфорную по ГОСТ 6552;

- кофеин (1,3,7-триметилксантин) молекулярной массы 194 г/моль, х.ч.;

- кремния карбид;

- натрия гидрофосфат додекагидрат (натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный) по ГОСТ 4172;

- натрия хлорид (натрий хлористый) по ГОСТ 4233;

- никотин с содержанием действующего вещества не менее 99%, молекулярной массой 162,2 г/моль;

- поливинилпирролидон;

- полисорбат 20 (твин 20);

- HEPES молекулярной массы 238,31 г/моль;

- колбы мерные вместимостью 100, 200, 500 и 1000 см³ по ГОСТ 1770;

- контейнеры пластиковые вместимостью 50 см³;

- ступку фарфоровую с пестиком по ГОСТ 9147;

- перчатки одноразовые для лабораторных исследований;

- растения индикаторные травянистые: марь вонючую (Chenopodium foetidum) (в возрасте четырех - шести листьев), табак Кливленда (Nicotiana clevelandii) (в возрасте пяти-шести листьев), или гибрид табака Кливленда (Nicotiana clevelandii x табака клейкого Nicotiana glutinosa), или табак Бентхама (Nicotiana benthamiana), или никандру физалисовидную (Nicandra physalodes) и горох посевной (Pisum sativum);

- халаты лабораторные.

6.4 Для проведения исследования серологическими методами по 8.3 используют:

- анализатор фотометрический иммуноферментный диапазоном длин волн от 400 до 800 нм и интерференционным светофильтром длиной волны 405 нм;

- встряхиватель лабораторный термостатируемый для 96-луночных планшетов, орбитального типа движения, диапазоном температур от 18 °C до 40 °C и скоростью вращения в диапазоне от 100 до 1300 об/мин;

- дозаторы восьмиканальные варьируемого объема от 100 до 200 мм³ в комплекте со сменными одноразовыми наконечниками по ГОСТ 28311;

- дозаторы одноканальные варьируемого объема от 10 до 500 мм³ в комплекте со сменными одноразовыми наконечниками по ГОСТ 28311;

- измельчитель лабораторный (гомогенизатор);

- измеритель pH диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH, имеющий минимальную чувствительность 0,1 ед. pH;

- камеру холодильную диапазоном температур от 2 °C до 5 °C по ГОСТ 26678;

- устройство промывочное для 96-луночных планшетов любого типа;

- центрифугу лабораторную для микроцентрифужных пробирок типа Эппендорф вместимостью от 1,5 до 2,0 см³, со скоростью вращения не менее 2000 об/мин, с функцией охлаждения;

- альбумин бычий сывороточный молекулярной массы 69000 г/моль, х.ч.;

- альбумин яичный, х.ч.;

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- диэтаноламин;

- калия дигидроортофосфат (калий фосфорнокислый однозамещенный) по ГОСТ 4198;

- калия хлорид (калий хлористый) по ГОСТ 4234;

- кислоту соляную по ГОСТ 3118;

- натрия гидрокарбонат (натрий двууглекислый) по ГОСТ 2156;

- натрия гидрофосфат додекагидрат (натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный) по ГОСТ 4172;

- ДИЕКА молекулярной массы 225,31 г/моль, х.ч.;

- натрия карбонат (натрий углекислый) по ГОСТ 83;

- натрия хлорид (натрий хлористый) по ГОСТ 4233;

- поливинилпирролидон;

- полисорбат 20 (твин 20);

- p-нитрофенилфосфат;

- колбы мерные вместимостью 100, 200, 500 и 1000 см³ по ГОСТ 1770;

- контейнеры пластиковые вместимостью 50 см³;

- пробирки конические микроцентрифужные с крышкой типа Эппендорф вместимостью от 1,5 до 2,0 см³;

- ступку фарфоровую с пестиком по ГОСТ 9147;

- тест-системы для проведения твердофазного ИФА потивируса шарки слив в модификациях DAS-ELISA и TAS-ELISA, включающие, в зависимости от изготовителя: планшеты полистироловые 96-луночные в комплекте с крышкой для закрывания или пленкой для заклеивания лунок, контроли положительные и отрицательные, специфические антитела, конъюгаты антител с ферментами-маркерами, буферные растворы и реактивы;

- перчатки одноразовые для лабораторных исследований;

- халаты лабораторные.

6.5 Для проведения исследования молекулярными методами по 8.4 используют:

- амплификатор под микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф вместимостью 0,2 и 0,5 см³ со скоростью нагрева/охлаждения активного элемента не менее 1,5 °C/с;

- измельчитель лабораторный (гомогенизатор);

- измеритель pH диапазоном измерений от 0 до 14 ед. pH, имеющий минимальную чувствительность 0,1 ед. pH;

- калия хлорид (калий хлористый) по ГОСТ 4234;

- камеру морозильную, способную поддерживать температуру до минус 80 °C по ГОСТ 26678;

- камеру холодильную диапазоном температур от 2 °C до 5 °C по ГОСТ 26678;

- микроцентрифугу-встряхиватель со скоростью вращения до 2000 об/мин;

- прибор для горизонтального электрофореза с комплектом кювет и гребенок;

- ПЦР-бокс или бокс ламинарный;

- ПЦР-детектор диапазоном длин волн от 470 до 580 нм;

- термостат твердотельный для микроцентрифужных пробирок типа Эппендорф, диапазоном температур от 25 °C до 100 °C;

- трансиллюминатор ультрафиолетовый в комплекте с гельдокументирующей системой;

- альбумин бычий сывороточный молекулярной массы 69000 г/моль, х.ч.;

- альбумин яичный, х.ч.;

- бромфеноловый голубой (краситель);

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- глицерин по ГОСТ 6259;

- калия дигидроортофосфат (калий фосфорнокислый однозамещенный) по ГОСТ 4198;

- кислоту уксусную по ГОСТ 61;

- натрия гидрофосфат додекагидрат (натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный) по ГОСТ 4172;

- натрия хлорид (натрий хлористый) по ГОСТ 4233;

- набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из растительных образцов;

- набор реагентов для проведения ОТ, включающий из расчета на один образец: 100 ед./мм³ обратной транскриптазы вируса лейкемии мышей (ревертазы MMLV) - 2 мм³ (200 ед.); 5x буферный раствор для синтеза первой цепи кДНК (гидрохлорида Трис молярной концентрации 280 ммоль/дм³, pH 8,7; хлорида калия молярной концентрации 375 ммоль/дм³; хлорида магния молярной концентрации 30 ммоль/дм³) - 4 мм³; ДТТ молярной концентрации 20 ммоль/дм³ - 2 мм³ (40 ммоль/дм³); смесь из четырех дезоксинуклеозидтрифосфатов (dNTP) (по 10 ммоль/дм³ каждого) - 2 мм³ (20 ммоль/дм³); 0,02 ммоль/дм³ праймера Oligo (dT)₁₇ - 0,5 мм³ (0,01 ммоль/дм³); 0,02 ммоль/дм³ праймера Random (dN)₁₀ - 0,5 мм³ (0,01 ммоль/дм³); РНК анализируемого образца - 5 мм³; воду стерильную - до 20 мм³.

Примечание - При использовании наборов реагентов с модифицированной ревертазой MMLV или обратной транскриптазой миелобластоза птиц (ревертаза AMV) состав и концентрацию ингредиентов реакционной смеси корректируют в соответствии с инструкциями изготовителей;

- набор реагентов для проведения ПЦР, включающий из расчета на один образец: 5x мастер-микс, содержащий Smart Taq-полимеразу; смесь из четырех дезоксинуклеозидтрифосфатов (dNTP), хлорида магния и реакционного буферного раствора - 5 мм³; специфические праймеры - по 2 мм³ каждого праймера (по 2 x 10^-8 ммоль/дм³); синтезированную кДНК - 4 мм³; воду стерильную - 12 мм³.

Примечание - При использовании наборов реагентов с другими типами Taq-полимеразы состав и концентрацию ингредиентов реакционной смеси корректируют в соответствии с инструкциями изготовителей;

- набор реагентов для проведения ПЦР в режиме реального времени и в формате FLASH;

- набор реагентов для проведения электрофореза;

- натрия гидрокарбонат (натрий двууглекислый) по ГОСТ 2156;

- натрия карбонат (натрий углекислый) по ГОСТ 83;

- поливинилпирролидон;

- раствор дезинфицирующий, вызывающий деградацию ДНК;

- трис(оксиметил)аминометан (Трис);

- ЭДТА;

- этидий бромистый, х.ч.;

- колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см³ по ГОСТ 1770;

- контейнеры пластиковые, вместимостью 50 см³;

- пробирки конические микроцентрифужные с крышкой типа Эппендорф вместимостью 0,2; 0,5; от 1,5 до 2,0 см³;

- ступку фарфоровую с пестиком по ГОСТ 9147;

- перчатки одноразовые для лабораторных исследований и резиновые;

- пленку лабораторную Парафилм;

- праймеры для универсального выявления всех изолятов потивируса шарки слив:

P1: 5'-ACC GAG ACC ACT ACA CTC CC-3';

P2: 5'-CAG ACT ACA GCC TCG CCA GA-3';

3'NCR sense: 5'-GTA GTG GTC TCG GTA TCT ACT ATA-3';

3'NCR antisense: 5'-GTC TCT TGC ACA AGA ACT ATA ACC-3';

- праймеры для выявления штамма PPV-D:

P1: 5'-3' ACC GAG ACC ACT ACA CTC CC;

PD: 5'-3' CTT CAA CGA CAC CCG TAC GG;

- праймеры для выявления штамма PPV-M:

P1: 5'-3' ACC GAG ACC ACT ACA CTC CC;

PM: 5'-3' CTT CAA CAA CGC CTG TGC GT;

- праймеры для выявления штамма PPV-Rec:

mD5: 5'-TAT GTC ACA TAA AGG CGT TCT C-3';

mM3: 5'-CAT TTC CAT AAA CTC CAA AAG AC-3';

- праймеры для выявления штамма PPV-C:

CSoC-2: 5'-TAC ATC TCG ATC CTT CCT C'-3';

HSoC-2: 5'-TCC ACC ATT CCC AAA TCT G'-3';

- праймеры для выявления штамма PPV-CR:

CR8597F: 5'-ATGATGTGACGTTAGTGGAC-3';

CR9023R: 5'-TCGTGTGTTAGACAGGTCAAC-3';

- праймеры для выявления штамма PPV-W:

W8328F: 5'-GCA TCA ATG GTA GAG GCA TG-3;

W8711R: 5'-CAT TGA CGT TGT GCT CTG CA-3;

- халаты лабораторные.

6.6 Допускается применение других средств измерений и посуды по метрологическим характеристикам, а также аппаратуры, реактивов и материалов по техническим характеристикам не хуже вышеуказанных.