ГОСТ Р 56145-2014. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые функциональные. Методы микробиологического анализа

7 Проведение анализа

 

7.1 Выявление бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

 

7.1.1 Сущность метода

Метод основан на посеве определенного количества продукта и (или) его разведений в жидкую селективную обогатительную среду с лактозой и желчью, инкубировании посевов при температуре 37 °C, регистрации признаков роста колиформных бактерий по накоплению газа в пробирке Дархама (поплавке), пересеве из пробирок или колб, в которых отмечены признаки роста, в пробирки с подтверждающей жидкой средой или на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения принадлежности выделенных микроорганизмов к колиформным бактериям по культуральным и/или биохимическим признакам.

7.1.2 Проведение анализа

Для посева используют те количества (объемы) пробиотических продуктов или соответствующих им десятикратных разведений, в которых предусматривается отсутствие БГКП (колиформных бактерий). Анализ проводят в двух повторностях.

7.1.2.1 Пробиотические продукты кисломолочные и сквашенные на молокосодержащей основе жидкие и пастообразные, в том числе мороженое, жидкие БАД к пище с пробиотическими микроорганизмами, напитки безалкогольные, обогащенные пробиотическими микроорганизмами, в том числе напитки брожения, предварительно подвергают нейтрализации по 5.1.5, 5.1.7, 5.1.8. Допускается разводить нормируемые объемы проб напитков брожения и концентратов для напитков безалкогольных, обогащенных пробиотическими микроорганизмами, перед посевом в жидкую селективную обогатительную среду в стерильной питьевой воде как указано в ГОСТ 30712.

Пробы сухих пробиотических продуктов и ингредиентов, содержащих пробиотические микроорганизмы, БАД к пище на основе пробиотических микроорганизмов сухих и высушенных в средах культивирования, засевают после разведения в стерильном изотоническом растворе хлористого натрия (разбавленном фосфатном буферном растворе) и при необходимости - нейтрализации по 5.4.3.

7.1.2.2 Подготовленные пробиотические продукты на молочной и молокосодержащей основе или их разведения засевают в среду Кесслер с лактозой нормальной концентрации по 5.3.13.1, в том числе пробы массой (объемом) 1 г (см³) - в пробирки с 10 см³ среды (при соотношении инокулята продукта и среды 1:10, не менее); пробы массой (объемом) свыше 1 г (см³) и до 10 г (см³) - в колбы с 50 см³ среды (при соотношении инокулята продукта и среды 1:5, не менее).

7.1.2.3 Подготовленные напитки безалкогольные, концентраты для напитков безалкогольных, обогащенные пробиотическими микроорганизмами, засевают в среду Кесслер с лактозой двойной концентрации по 5.3.13.1, в том числе пробы объемом 100 см³ - в колбы со 100 см³ среды, разведения проб объемом 10 см³ - в пробирки с 10 см³ среды, соблюдая соотношение инокулята продукта и среды 1:1, не менее. Подготовленные напитки брожения, обогащенные пробиотическими микроорганизмами, засевают в среду Кесслер с лактозой нормальной концентрации по 5.3.13.1, в том числе пробы объемом 1 см³ и разведения проб объемом 1 см³ - в пробирки с 10 см³ среды, соблюдая соотношение инокулята продукта и среды 1:10, не менее.

7.1.2.4 Подготовленные пробы БАД к пище на основе пробиотических микроорганизмов и ингредиентов, содержащих пробиотические микроорганизмы, или их разведения засевают в жидкие селективные обогатительные среды с лактозой по пп. 5.3.13.1 или 5.3.13.2 двойной концентрации, в том числе пробы массой (объемом) 10 г (см³) или разведения проб объемом 10 см³ - в пробирки с 10 см³ среды, соблюдая соотношение инокулята продукта и среды 1:1, не менее. Для анализа образцов массой 2 г, подготовленную пробу засевают в пробирки с 10 см³ среды или используют удвоенное число пробирок для исходного разведения объемом 10 см³.

7.1.2.5 Посевы помещают в термостат при температуре (37 +/- 1) °C на (48 +/- 2) ч, с предварительным учетом положительных результатов через (24 +/- 2) ч.

7.1.2.6 Положительными считают результаты посева при наличии таких признаков роста как газообразование, помутнение, затрудняющее выявление газообразования.

Для окончательного заключения о наличии в продукте БГКП (колиформных бактерий), из каждой положительной колбы или пробирки производят высев бактериологической петлей на поверхность одной из агаризованных селективно-диагностических сред Эндо или Левина (см. 5.3.13.5) или в пробирки с одной из подтверждающих жидких сред с лактозой нормальной концентрации (см. 5.3.13.1 - 5.3.13.4). Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч.

7.1.2.7 Допускается считать положительными посевы пробиотических продуктов на молочной и молокосодержащей основе в среде Кесслер с лактозой, а также все посевы на жидких селективных обогатительных средах нормальной концентрации при наличии в них отчетливого газообразования. В таких случаях допускается выдавать заключение о наличии колиформных бактерий в анализируемой массе (объеме) продукта без подтверждения их принадлежности путем пересева на селективно-диагностические среды и жидкие среды с лактозой.

7.1.2.8 При отсутствии признаков роста на жидких селективных обогатительных средах (газообразование, помутнение, образования осадка или пленок, изменение цвета среды) через 48 ч результаты посева считают отрицательными и дают заключение об отсутствии БГКП (колиформных бактерий) в анализируемой массе (объеме) продукта.

7.1.3 Обработка результатов

7.1.3.1 При отсутствии на среде Эндо или Левина колоний, типичных для БГКП (колиформных бактерий) (на среде Эндо - красных с металлическим блеском или без него, розовых и бледно-розовых; на среде Левина - черных с металлическим блеском, темных с черным центром, сиреневых с темным центром) засеянная масса (объем) продукта считается незагрязненной ими, то есть в анализируемом продукте БГКП не обнаружены.

7.1.3.2 При наличии на среде Эндо или Левина типичных или подозрительных для БГКП (колиформных бактерий) колоний из них делают препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Обнаружение грамотрицательных не содержащих спор палочек указывает на наличие БГКП (колиформных бактерий) в анализируемой массе (объеме) продукта.

7.1.3.3 При учете результатов подтверждения на жидкой среде, пробирки с жидкими селективными средами с лактозой нормальной концентрации по 5.3.13.1 - 5.3.13.4, засеянные по 7.1.2.6, в которых отмечено образование газа после (24 +/- 2) ч или после (48 +/- 2) ч, считают положительными. Если в течение (24 +/- 2) ч в посевах нет образования газа, то продолжают наблюдение до (48 +/- 2) ч. Выявление газообразования указывает на наличие БГКП (колиформных бактерий) в анализируемой массе (объеме) продукта.

7.1.3.4 При обнаружении колиформных бактерий только в одной из повторностей анализ следует повторить, как указано в ГОСТ 30712. Если колиформные бактерии будут вновь обнаружены в обеих или одной из повторностей, то это свидетельствует об обнаружении колиформных бактерий в анализируемой массе (объеме) продукта.

 

7.2 Определение презумптивных Escherichia coli

 

7.2.1 Анализ на наличие в пробиотических продуктах презумптивных Escherichia coli проводят в соответствии с ГОСТ 31708 со следующими дополнениями.

7.2.2 Подготовка проб, предварительная инкубация и селективное обогащение

7.2.2.1 Подготовку проб к анализу проводят с учетом положений 5.1.5, 5.1.7, 5.1.8.

Размер пробы для анализа соответствует массе (г) или объему (см³) продукта, в котором нормируют отсутствие Escherichia coli [1], [2].

Для выявления презумптивных Escherichia coli в сухих функциональных продуктах и сухих функциональных пищевых ингредиентах, содержащих пробиотические микроорганизмы, проводят посев определенных количеств продукта с предварительной инкубацией в жидкой неселективной среде.

Для выявления презумптивных Escherichia coli в продуктах жидкой и пастообразной консистенции проводят посев определенных количеств продукта или его соответствующих разведений непосредственно в жидкую селективную обогатительную питательную среду лаурил-сульфат-бульон (см. 5.3.13.3) по ГОСТ 31708.

7.2.2.2 Асептически взвешивают определенное количество сухого продукта, подготовленного по 5.1.6, и помещают в колбы с забуференной пептонной водой по 5.3.8, предварительно нагретой в инкубаторе до температуры 37 °C, исходя из соотношения продукта и среды 1:9 (масса к объему или объем к объему). Смесь тщательно перемешивают. Допускается доводить активную кислотность до 7,0 ед. pH непосредственно в смеси для предварительной инкубации при использовании стерильных растворов гидроокиси натрия или соляной кислоты и проверяя pH индикаторной бумагой.

Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 ч.

7.2.2.3 На следующий день из этих колб переносят 1,0 см³ культуральной жидкости в пробирку с 9 см³ жидкой селективной обогатительной средой лаурил-сульфат-бульон (см. 5.3.13.3), и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч.

Через 24 ч посевы просматривают, при отсутствии признаков роста пробирки оставляют в термостате еще на (24 +/- 1) ч. При наличии признаков роста (газообразование, образование хлопьев, потемнение) производят пересев в пробирки с 10 см³ жидкой селективной среды EC-бульон по 5.3.13.4.

Посевы инкубируют при температуре 44 °C до 48 ч.

7.2.3 Подтверждение принадлежности микроорганизмов, выросших в жидких средах по 7.2.2.3, к презумптивным E. coli и оценка результатов посева - по ГОСТ 31708.

7.2.4 При необходимости подтверждение принадлежности обнаруженных презумптивных E. coli и дифференциацию от других видов рода Escherichia осуществляют по ГОСТ 30726 (с учетом приложения А), подтверждение принадлежности к E. coli O157 - по ГОСТ 32011 после пересева микроорганизмов, выросших в жидких средах, на поверхность среды Эндо, Левина (см. 5.3.13.5) по ГОСТ 26670.

7.3 Определение сальмонелл проводят по ГОСТ 31659 со следующими дополнениями.

7.3.1 Предварительное обогащение в жидкой неселективной среде

Для посева используют те количества пробиотических продуктов, в которых регламентируется отсутствие бактерий рода Salmonella. Пробу продукта, подготовленную по 5.1.5, асептично переносят в колбу со средой для предварительного обогащения (забуференной пептонной водой) по 5.3.8, подогретой до температуры (37 +/- 1) °C, при соотношении продукта и среды 1:9 (масса к объему или объем к объему).

Допускается доводить активную кислотность до 7,0 ед. pH непосредственно в смеси для предварительной инкубации при использовании стерильных растворов гидроокиси натрия или соляной кислоты, проверяя pH индикаторной бумагой.

Например, при необходимости подтверждения отсутствия бактерий рода Salmonella в 25 г продукта, пробу размером 25 г инокулируют в 225 см³ забуференной пептонной воды.

Для ингибирования присутствующих в продуктах жизнеспособных пробиотических микроорганизмов и создания условий для обогащения сальмонелл непосредственно перед посевом в забуференную пептонную воду добавляют вспомогательные компоненты, не препятствующие росту сальмонелл по ГОСТ ISO 27205.

При анализе проб, содержащих пробиотические микроорганизмы в количествах до 10⁸ КОЕ/г (см³), используют забуференную пептонную воду с ванкомицином (10 мг/дм³).

При анализе проб, содержащих пробиотические микроорганизмы в количествах выше 10⁸ КОЕ/г (см³), используют забуференную пептонную воду двойной концентрации (по ГОСТ 31659) с добавлением ванкомицина (10 мг/дм³), малахитового зеленого (40 мг/дм³) и молока (10 г/дм³).

Примечание - Добавление молока для уменьшения токсических свойств малахитового зеленого на бактерии рода Salmonella необходимо только для проб пробиотических продуктов и БАД к пище, не содержащих молока.

 

Допускается использовать более высокий коэффициент разбавления, в случае необходимости, чтобы уровень пробиотических микроорганизмов в среде для предварительного обогащения непосредственно после добавления пробы к среде не превысил 10¹⁰ КОЕ/г (см³).

Посевы инкубируют в течение (18 +/- 2) ч при температуре (36 +/- 1) °C.

7.3.2 Обогащение в жидкой селективной среде

Из посевов с предварительным обогащением по окончании инкубации делают пересевы параллельно в две жидкие среды для селективного обогащения: магниевую среду Раппапорта-Вассилиадиса (RVS-бульон) по 5.3.14.1 и одну из двух сред - селенитовую по 5.3.14.2 или бульон тетратионатный Мюллера-Кауфмана (MKT-бульон) по 5.3.14.3, соблюдая соотношение инокулята и среды не менее 1:9.

Посевы в RVS-бульоне инкубируют при температуре (41,5 +/- 1,0) °C в течение (24 +/- 3) ч, а во второй используемой для анализа среде - при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч.

7.3.3 Высев из пробирок с жидкими селективными средами на поверхность агаризованных дифференциально-диагностических сред и обработку результатов проводят по ГОСТ 31659.

При отсутствии типичных колоний сальмонелл на каждой из сред конечный результат анализа записывают как отрицательный, то есть в анализируемой массе продукта сальмонеллы отсутствуют.

При наличии на любой из питательных сред на чашках Петри типичных или подозрительных колоний на сальмонеллы, проводят изучение выделенных на чашках колоний, подтверждение их принадлежности к бактериям рода Salmonella, обработку результатов по ГОСТ 31659 со следующими дополнениями.

7.3.4 Из каждой среды на чашке Петри, содержащей колонии, подозрительные на принадлежность к сальмонеллам, выбирают хорошо изолированную колонию и высевают штрихом (на скошенную поверхность) и уколом (в глубину столбика) на TSI-агар комбинированный с мочевиной (см. 5.3.14.5) или среду Клиглера с мочевиной (см. 5.3.14.7). При наличии смешанного роста предварительно делают пересев на поверхность любой из агаризованных питательных сред (питательный агар, мясо-пептонный агар, триптозный ГРМ-агар, триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом), приготовленных по 5.3.11, для получения изолированных колоний. После проверки чистоты культуры путем микроскопирования окрашенных по Граму мазков отобранные колонии засевают в пробирки с TSI-агаром комбинированным с мочевиной или средой Клиглера с мочевиной.

Пробирки с посевами выдерживают в термостате при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 1) ч.

7.3.5 По окончании инкубации производят интерпретацию признаков роста на углеводных средах по ферментации сахаров и по расщеплению мочевины.

Культуры сальмонелл ассимилируют и сбраживают глюкозу, не ассимилируют лактозу, образуют сероводород, не разлагают мочевину. Покраснение или пожелтение (в зависимости от добавленного индикатора) скошенной части столбика среды указывает на образование кислоты в результате ферментации лактозы, сахарозы или обоих сахаров. Покраснение самого столбика указывает на расщепление глюкозы. Восстановление цвета среды до исходного (бледно-розовый) свидетельствует о расщеплении мочевины.

Об образовании сероводорода судят по почернению среды в столбике.

Если культуры ферментируют лактозу с образованием газа и расщепляют мочевину, они не принадлежат к бактериям рода Salmonella.

Культуры, не ферментирующие лактозу и не расщепляющие мочевину, но ферментирующие глюкозу (с образованием или без образования газа), подвергаются дальнейшему изучению.

Культуры, ферментирующие глюкозу без образования газа, подозрительны как брюшнотифозные или дизентерийные.

Культуры, ферментирующие глюкозу с образованием газа и продуцирующие сероводород, могут принадлежать к роду Salmonella.

Если ни в одной из пробирок не обнаружено ни одной характерной для сальмонелл реакции, то результат считают отрицательным и дают заключение об отсутствии в анализируемой массе продукта бактерий рода Salmonella.

Допускается использовать углеводные среды TSI-агар, агар Клиглера, среду Олькеницкого, указанные в ГОСТ 31659, без мочевины. В таких случаях интерпретацию результатов и тестирование способности культур расщеплять мочевину на отдельной среде агаре Кристенсена проводят по ГОСТ 31659.

7.3.6 Дальнейшее изучение культур, ферментирующих глюкозу с образованием или без образования газа, образующих и не образующих сероводород, в том числе ферментирующих лактозу <*>, подтверждение их принадлежности к бактериям рода Salmonella и обработку результатов проводят по ГОСТ 31659.

--------------------------------

<*> Кроме не расщепляющих мочевину лактозоположительных культур.

 

7.4 Выявление коагулазоположительных стафилококков и S. aureus

 

7.4.1 Анализ на наличие в пробиотических продуктах коагулазоположительных стафилококков и S. aureus проводят в соответствии с ГОСТ 31746 со следующими дополнениями.

7.4.2 Проведение анализа

7.4.2.1 Для выявления коагулазоположительных стафилококков и S. aureus в сухих функциональных продуктах и сухих функциональных пищевых ингредиентах, содержащих пробиотические микроорганизмы, проводят посев определенного количества продукта или определенного количества его соответствующего разведения с предварительной инкубацией в жидкой неселективной среде.

Для выявления коагулазоположительных стафилококков и S. aureus в продуктах жидкой и пастообразной консистенции проводят посев определенных количеств продукта или его соответствующего разведения непосредственно в жидкие селективные питательные среды.

Перед посевом для выявления S. aureus в жидких средах создают анаэробные условия кипячением пробирок на водяной бане при (100 +/- 1) °C в течение 15 мин либо путем инкубирования пробирок в анаэробных условиях по ГОСТ 31746.

7.4.2.2 Асептически взвешивают определенное количество сухого продукта, подготовленного по 5.1.6, и помещают в колбы с забуференной пептонной водой по 5.3.8 для предварительной инкубации при соотношении продукта и среды 1:9. Тщательно перемешивают. Посевы выдерживают в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 ч. На следующий день пипеткой переносят 1,0 см³ культуральной жидкости в пробирку с солевым бульоном (см. 5.3.15.1) или с бульоном Жиолитти-Кантони (см. 5.3.15.2) и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч.

7.4.2.3 Жидкие и пастообразные продукты на молочной основе, подготовленные по 5.1.5, 5.1.7, 5.1.8, не подвергающиеся предварительной инкубации, в определенных количествах или объемах засевают в пробирки или колбы с солевым бульоном по 5.3.15.1 при соотношении продукта и среды 1:9. инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч.

Немолочные жидкие и пастообразные продукты, подготовленные по 5.1.5, 5.1.7, 5.1.8, не подвергающиеся предварительной инкубации, в определенных количествах или объемах засевают в пробирки или колбы с солевым бульоном по 5.3.15.1 или в пробирки или колбы с модифицированным Жиолитти-Кантони бульоном по 5.3.15.2 при соотношении продукта и среды 1:9, инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч.

7.4.2.4 Учитывают признаки роста в жидких селективных питательных средах через 24 ч инкубации. О предположительном присутствии коагулазоположительных стафилококков в солевом бульоне свидетельствует помутнение среды, в бульоне Жиолитти-Кантони - редукция теллурита калия. При отсутствии признаков роста пробирки продолжают инкубировать до 48 ч.

7.4.2.5 Из пробирок с признаками роста производят пересев петлей для получения изолированных колоний на поверхность одной из предварительно подсушенных питательных сред: Байрд-Паркер агара (см. 5.3.15.3), ЖСА (желточно-солевой агар) (см. 5.3.15.4) или молочно-солевого агара (см. 5.13.5.5). Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37 +/- 1) °C от 24 до 48 ч.

7.4.2.6 Изучение выделенных на чашках колоний и подтверждение их принадлежности к коагулазоположительным стафилококкам и к S. aureus, обработку результатов проводят по ГОСТ 31746.

 

7.5 Определение количества дрожжей и плесневых грибов

 

7.5.1 Анализ для определения количества дрожжей и плесневых грибов в функциональных пищевых продуктах и функциональных пищевых ингредиентах, содержащих пробиотические микроорганизмы, проводят в соответствии с ГОСТ 10444.12 со следующими дополнениями.

7.5.2 Проведение анализа

7.5.2.1 Подготовку проб и приготовление разведений для посева проводят согласно 5.1, 5.4.

7.5.2.2 Для анализа проб продуктов, содержащих пробиотические микроорганизмы в количествах выше 10⁸ КОЕ/г (см³) или дрожжи в качестве заквасочной культуры, используют питательные среды с добавлением неомицина, хлорамфеникола или хлорамфеникола и хлортетрациклина гидрохлорида.

7.5.3 Инокуляция чашек

Для определения количества дрожжей и плесневых грибов вносят по 1,0 см³ жидкого продукта из каждой пробы, подготовленной по 5.1.5 - 5.1.8 или по 1,0 см³ разведений 1:10 и 1:100, подготовленных по 5.4, в две чашки Петри, каждую с заранее промаркированными крышками. Посевы в чашках Петри заливают не позднее чем через 15 - 20 мин 14,0 см³ одной из агаризованных сред по 5.3.16.2 - 5.3.16.4, 5.3.16.6, расплавленных и охлажденных до (45 +/- 1) °C. Среду немедленно тщательно перемешивают и оставляют для застывания.

Допускается использовать поверхностный метод посева с инокуляцией 1 см³ подготовленных проб жидкого продукта или разведений продукта иной консистенции на поверхность подсушенных агаризованных сред по 5.3.16.2 - 5.3.16.4, 5.3.16.6 в чашках Петри путем равномерного распределения инокулята, выдерживания в течение 10 мин и последующего удаления невпитавшейся жидкости стерильной пипеткой.

Поверхностный метод посева не применяется к функциональным пищевым продуктам и функциональным пищевым ингредиентам, содержащим в своем составе аэробные по природе молочнокислые микроорганизмы рода Lactococcus и вида Streptococcus thermophilus.

7.5.4 Подсчет колоний, отбор колоний для подтверждения принадлежности к дрожжам и плесеням, обработку и представление результатов проводят по ГОСТ 10444.12.

Примечание - Следует учитывать, что согласно [5] из-за низкого содержания азотистых соединений и низкого уровня pH в среде по 5.3.16.4 молочнокислые микроорганизмы, содержащиеся в составе функциональных пищевых продуктов и функциональных пищевых ингредиентов на молочной основе, могут давать точечные пылевидные колонии, которые не подлежат учету.

 

7.6 Определение бактерий Listeria monocytogenes

 

7.6.1 Анализ на наличие в пробиотических продуктах бактерий Listeria monocytogenes проводят по ГОСТ 32031 со следующими дополнениями.

7.6.2 Подготовку проб к анализу проводят с учетом положений 5.1.5, 5.1.7, 5.1.8 и [6].

7.6.3 Проведение анализа

7.6.3.1 Размер пробы для анализа соответствует массе (г) или объему продукта (см³), в котором нормируют отсутствие бактерий Listeria monocytogenes [1], [2].

7.6.3.2 Анализируемую пробу X (г или см³) вносят в селективную среду первичного обогащения, исходя из соотношения продукта и среды 1:9 (масса к объему или объем к объему).

Посевы культивируют при температуре (30 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч.

Примечания

1 Первичное селективное обогащение необходимо для восстановления поврежденных клеток листерий, а также для ингибирования роста конкурентной микрофлоры пробиотических продуктов (живых пробиотических и молочнокислых бактерий родов Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Streptococcus spp.).

2 Ввиду сходства биологических характеристик, питательных потребностей, оптимумов pH, температуры для роста листерий и молочнокислых микроорганизмов (см. [7]), на этапах первичного и вторичного обогащения листерий используют питательные среды с селективными добавками, к которым проявляют наибольшую чувствительность присутствующие в составе продуктов пробиотические микроорганизмы.

3 При этом учитывают, что лактококки и стрептококки ингибируются в присутствии акрифлавина и налидиксовой кислоты. Чувствительность к антимикробным агентам бактерий рода Lactobacillus зависит от штамма, но большинство промышленно-значимых штаммов проявляет чувствительность к полимиксину (см. [8]).

 

7.6.4 Пересев культуральной жидкости из среды первичного обогащения в среду вторичного обогащения, инкубирование и последующий пересев на плотные дифференциально-диагностические среды осуществляют по ГОСТ 32031.

7.6.5 Изучение выделенных на чашках колоний, подтверждение их принадлежности к Listeria monocytogenes и обработку результатов проводят по ГОСТ 32031.