ГОСТ Р 56139-2014. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые специализированные и функциональные. Методы определения и подсчета пробиотических микроорганизмов

8.2 Глубинный метод посева в жидкие и полужидкие питательные среды в пробирках

8.2.1 Используют три ряда пробирок, содержащих полужидкую питательную среду или стерильное обезжиренное молоко, для высева в них соответствующих разведений анализируемого продукта для определения количества пробиотических микроорганизмов по методу наиболее вероятного числа (НВЧ). Перед проведением анализа среду, разлитую при приготовлении высоким столбиком (не менее 10 см³ в пробирке), нагревают в кипящей водяной бане до полного расплавления агара в среде и выдерживают в кипящей водяной бане в течение (25 +/- 5) мин для снижения в ней содержания растворенного кислорода. Затем пробирки охлаждают в водяной бане до температуры (45 +/- 2) °C. Исследуемую пробу из трех последовательных разведений вносят в питательную среду в трехкратной повторности начиная с последнего выбранного десятикратного разведения анализируемого продукта, по 1 см³ в заранее промаркированные три пробирки питательной среды последовательно от большего разведения к меньшему. При внесении разведений в питательную среду проводят тщательное перемешивание пипеткой, а затем круговыми движениями руки или с помощью шуттель-аппарата, не допуская вспенивания и насыщения воздухом. Для каждого посева берут новую стерильную пипетку. Пробирки с посевами охлаждают до температуры инкубирования и затем помещают в термостат, установленный на соответствующую температуру.

Для обеспечения оптимальных условий роста бактерий рода Lactobacillus, Bifidobacterium, Propionibacterium осуществляют ограничение доступа кислорода по 8.1.3.

8.2.2 Если ожидается рост большого числа бифидобактерий при определении их количества, например, при проведении производственного контроля по [6], допускается осуществлять посев разведений, необходимых для подсчета, в два ряда пробирок по ГОСТ 33491.