ГОСТ Р 56139-2014. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые специализированные и функциональные. Методы определения и подсчета пробиотических микроорганизмов

7.4 Приготовление разведений продуктов для посева

7.4.1. К анализируемой пробе жидкого продукта объемом 10 см³ или твердого продукта массой 10 г добавляют предварительно регенерированный по 6.4.2 стерильный разбавленный фосфатный буферный раствор, фосфатно-тиогликолевый буферный раствор или раствор лимоннокислого натрия до достижения общего объема или массы пробы 100 см³ (г), после чего смесь опять тщательно перемешивают до гомогенного состояния. Таким образом, получают первое разведение продукта (1x10^-1).

7.4.2 Первое разведение для сухих кисломолочных продуктов, сквашенных пробиотических продуктов на молокосодержащей основе и БАД на основе пробиотических микроорганизмов, высушенных в среде культивирования, нейтрализуют. Для этого на каждые 10 см³ разведения в стерильную посуду добавляют 1,0 см³ стерильного раствора натрия гидрокарбоната с массовой концентрацией 100 г/дм³; содержимое перемешивают с использованием стерильных приспособлений или шуттель-аппарата. Общая масса первого разведения пробы с разбавителем и нейтрализующим раствором должна составлять 100 г.

7.4.3 При анализе специализированных и функциональных пищевых продуктов в капсулированном виде ее освобождают от капсул в асептических условиях с применением стерильных инструментов.

7.4.4 При анализе специализированных и функциональных пищевых продуктов, содержащих пробиотические микроорганизмы в микрокапсулированной форме, при приготовлении первого разведения необходимо освободить микроорганизмы от покрытий путем растворения последних.

7.4.4.1 Для удаления покрытия из полисахаридов производится энергичное перемешивание взвеси первого разведения в течение 10 - 15 мин круговыми движениями.

7.4.4.2 Для удаления двойного покрытия из полисахаридов и белков/пептидов производится энергичное перемешивание взвеси первого разведения не менее 21 мин круговыми движениями. Порядок операций следующий: осторожное размешивание (без образования пузырьков) в течение двух минут, отстаивание в течение пяти минут, операции повторяют три раза для полного растворения покрытия.

7.4.4.3 Для того чтобы проверить, растворилось ли покрытие, из пробы первого разведения готовят микроскопический препарат и просматривают его под микроскопом. Если клетки остались в агрегированном состоянии и покрытия полностью не растворились, процедуру удаления покрытия повторяют.

7.4.5 Последующие десятикратные разведения специализированного и функционального пищевого продукта готовят, добавляя в 9 см³ предварительно регенерированного разбавленного фосфатного буферного раствора, фосфатно-тиогликолевого буферного раствора или раствора лимоннокислого натрия по 1 см³ предыдущего разведения специализированного и функционального пищевого продукта. Перемешивание предыдущего разведения осуществляют путем осторожного промывания пипетки до 10 раз полученной смесью до верхнего уровня имеющихся на ней делений, не допуская появления пузырьков и насыщения смеси воздухом. Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку.

7.4.6 Разведения готовят с таким расчетом, чтобы последние из них не содержали пробиотических микроорганизмов. Для посева в (на) питательные среды выбирают разведения продукта, согласно таблице 1.

 

Таблица 1

 

Нормируемое количество пробиотических микроорганизмов	Рекомендуемое разведение для посева
106	10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8
107	10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9
108	10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10
109	10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11
1010	10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12

 

Примечание - В случае ожидаемого большого количества пробиотических микроорганизмов в специализированных и функциональных пищевых продуктах допускается использовать для посева разведения продукта со степенью, соответствующей нормируемому уровню их содержания, а также разведения на один порядок выше и ниже.