ГОСТ ISO 13493-2014. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии
9. Проведение анализа
Примечание - Для контроля повторяемости результатов (см. 11.2) проводят два параллельных определения в соответствии с 9.1 - 9.6.
9.1 Общая часть
Параллельно с анализом раствора (или серии растворов), полученного из анализируемой пробы (или нескольких анализируемых проб), проводят анализ раствора, полученного из пробы, заведомо не содержащей хлорамфеникол (контрольная проба), и раствора, полученного из пробы, в которую добавлен хлорамфеникол в количестве 10 мкг/кг (контрольная проба с внесенным хлорамфениколом).
9.2 Подготовка части пробы для анализа
В конической колбе вместимостью 100 см3 взвешивают 10 г (m) измельченной анализируемой пробы (см. раздел 8) с точностью 0,1 г.
9.3 Приготовление экстракта
Добавляют 40,0 см3 воды и энергично перемешивают в течение 3 мин с помощью лабораторного гомогенизатора (см. 6.4).
Общий объем образующейся водной фазы (V1) равен 40,0 см3 плюс объем воды, содержащейся в части пробы для анализа (обычно в 10 г пробы содержится примерно 7,5 см3 воды).
Гомогенат фильтруют через бумажный фильтр (см. 6.5).
9.4 Твердофазная экстракция
Переносят 20 см3 полученного фильтрата (V2) в экстракционный патрон (см. 6.6).
Через (15 +/- 2) мин элюируют хлорамфеникол с помощью 70 см3 дихлорметана (см. 5.3). Выпаривают органическую фазу до объема примерно 1 см3 на водяной бане (см. 6.7) в слабом потоке азота (см. 5.2) или с помощью ротационного вакуумного испарителя (см. 6.7).
С помощью примерно 10 см3 дихлорметана (см. 5.3) переносят остаток в центрифужную пробирку (см. 6.8).
Осторожно выпаривают досуха.
9.5 Жидкостная экстракция
К остатку добавляют 400 мм3 воды (V3) и 2,0 см3 толуола (см. 5.4) и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (см. 6.9) с частотой вращения примерно 700 мин-1.
Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (см. 6.10) с радиальным ускорением 1000 g.
Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее.
Добавляют 1,5 см3 толуола и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (см. 6.9) с частотой вращения примерно 700 мин-1.
Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (см. 6.10) с радиальным ускорением 1000 g.
Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее.
Микропипеткой (см. 6.11) переносят 300 мм3 водной фазы в подходящий сосуд.
9.6 Хроматографический анализ
9.6.1 Условия хроматографирования
Длина волны ................................. 285 нм;
диапазон шкалы детектора .................... от 0,005 до 0,010 единиц
оптической плотности,
что соответствует полной
шкале самописца;
шкала самописца ............................. 10 мВ;
скорость бумаги самописца ................... 1,0 см/мин;
объемная скорость потока подвижной фазы
(см. 5.7) ................................... 0,6 см3/мин;
объем анализируемого раствора, вводимый
(инжектируемый) в хроматограф ............... 100 мм3.
Примечание - Инжектируемый объем и объемная скорость потока зависят от размеров колонки.
9.6.2 Хроматографирование
После стабилизации системы жидкостного хроматографа (см. 6.12) инжектируют растворы, полученные из контрольной пробы и контрольной пробы с внесенным хлорамфениколом, четыре стандартных раствора хлорамфеникола (см. 5.9), раствор, приготовленный из анализируемой пробы по 9.5, и снова стандартные растворы хлорамфеникола (см. 5.9).
На хроматограммах проб проверяют наличие сигнала на участке, соответствующем времени удерживания хлорамфеникола.
9.6.3 Измерение
Измеряют высоты или площади хроматографических пиков хлорамфеникола для анализируемого раствора и стандартных растворов хлорамфеникола.
Измеренные для стандартных растворов высоты или площади пиков должны линейно зависеть от содержания хлорамфеникола в этих растворах.
Примечание - С помощью диодно-матричного детектора может быть подтверждено обнаружение хлорамфеникола при его содержании в образце более 10 мкг/кг.
Подписаться на обновления