ГОСТ 32798-2014. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания аминогликозидов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
6.4 Построение градуировочной характеристики
6.4.1 Для получения градуировочных данных используют не менее трех уровней концентраций матричных градуировочных растворов. Определяемое в анализируемом образце содержание аминогликозидов должно находиться в диапазоне концентраций градуировочной характеристики.
6.4.2 При установлении градуировочной характеристики в инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 и не менее двух раз матричные градуировочные растворы G1 - G5 (6.3.3) различных уровней концентраций в условиях, указанных в 6.5.
6.4.3 Вычисление площади пика проводят по выбранному дочернему иону анализируемого соединения
Для подтверждения идентичности каждого обнаруженного аминогликозида рассчитывают отношение площадей пиков двух дочерних ионов для каждого соединения в градуировочном растворе.
6.4.4 Время удерживания определяемых веществ устанавливают при анализе градуировочных растворов. Значения абсолютного времени удерживания анализируемых соединений в предложенных хроматографических условиях приведены в таблице 1.
Таблица 1
Время удерживания аминогликозидов и отношения массы
к заряду (m/z) для их ионов
Аминогликозид | Время удерживания, мин | Ион-предшественник, m/z | Дочерние ионы, m/z <*> |
Амикацин | 7,8 | 586,3 | 264,2/425,2 |
Апрамицин | 10,7 | 540,3 | 378,2/217,1 |
Гентамицин | 12,4 | 478,3 | 322,2/157,1 |
Гигромицин Б | 6,2 | 528,3 | 177,1/352,1 |
Дигидрострептомицин | 6,7 | 584,3 | 263,1/392,2 |
Канамицин А | 8,2 | 485,3 | 324,2/163,1 |
Неомицин | 12,8 | 615,4 | 203,1/293,1 |
Паромомицин | 10,5 | 616,3 | 293,1/324,2 |
Спектиномицин | 5,1 | 351,2 | 207,2/158,1 |
Стрептомицин | 6,5 | 582,3 | 263,2/390,2 |
<*> Первый из указанных ионов используют для количественного определения, второй - для идентификации. | |||
Относительное отклонение времени удерживания каждого аминогликозида в анализируемых пробах от градуировочных данных не должно превышать 2,5%.
6.4.5 Для проверки приемлемости результатов измерений рассчитывают значение относительной повторяемости ri, %, параллельных определений для каждого градуировочного образца - разности между результатами параллельных определений, отнесенные к их среднему значению по формуле
(3)
где Xi1 и Xi2 - параллельные определения при получении i-го результата количественного химического анализа;
- среднеарифметическое значение Xi1 и Xi2 (i-й результат анализа).
Значения ri (i = 1, 2, ...) не должны превышать пределов повторяемости rотн, установленных при P = 0,95 и приведенных в таблице 2.
Таблица 2
Пределы относительной повторяемости rотн
Аминогликозид | Диапазон измерений содержания аминогликозидов, мкг/кг | Предел повторяемости rотн, %, при P = 0,95, i = 2 |
Амикацин | От 100 до 400 включ. | 50 |
Апрамицин | " 400 " 1600 " | 69 |
Гентамицин | " 20 " 80 " | 55 |
Гигромицин Б | " 100 " 400 " | 83 |
Дигидрострептомицин | " 100 " 800 " | 58 |
Канамицин А | " 40 " 160 " | 83 |
Неомицин | " 200 " 800 " | 72 |
Паромомицин | " 200 " 800 " | 61 |
Спектиномицин | " 100 " 400 " | 72 |
Стрептомицин | " 100 " 800 " | 80 |
6.4.6 Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят после анализа каждых 20 исследуемых образцов однократным измерением градуировочных растворов G3 и G4. Градуировочная характеристика считается стабильной, если рассчитанные значения концентраций определяемых веществ находятся в диапазоне 75% - 125%. В противном случае проводят повторный анализ градуировочных растворов, построение градуировочной характеристики и анализ испытуемых проб.
Подписаться на обновления