ГОСТ 32798-2014. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания аминогликозидов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

6.3 Приготовление градуировочных растворов

 

6.3.1 Приготовление исходных растворов аминогликозидов C₀

Для приготовления исходных растворов веществ для градуировки C₀ с концентрацией 500 мкг/см³ для каждого аминогликозида рассчитывают необходимую массу анализируемой пробы i-го вещества, мг, с учетом содержания свободного основания по формуле

 

(1)

 

где C₀ - концентрация исходного раствора, мг/см³;

V - объем мерной колбы, см³;

P_i - содержание свободного основания i-го вещества, %.

На лабораторных весах измеряют массу мерной колбы вместимостью 10 см³. В колбу вносят анализируемую пробу вещества для градуировки, несколько превышающую расчетную, и снова взвешивают. По разности масс находят массу внесенного вещества (она должна совпадать с расчетной или несколько превышать ее). Добавляют 8 см³ деионизированной воды, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. Доводят объем до метки этим же растворителем и снова перемешивают.

Для получения требуемой концентрации исходных растворов добавляют пипеткой в каждую колбу дополнительный объем деионизированной воды для i-го вещества, см³, рассчитанный по формуле

 

(2)

 

где m_ci - масса анализируемой пробы i-го вещества, мг;

m_i - расчетная масса анализируемой пробы i-го вещества, мг;

P_i - содержание свободного основания i-го вещества, %;

C₀ - концентрация исходного раствора, мг/см³.

Срок годности растворов при температуре от минус 20 °C до минус 40 °C - не более 1 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.2 Приготовление рабочего раствора C₁

Для приготовления рабочего раствора C₁ в мерную колбу вместимостью 10 см³ переносят следующие объемы каждого раствора C₀: гентамицина - 80 мм³, канамицина - 160 мм³, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 400 мм³, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 800 мм³, апрамицина - 1600 мм³, доводят объем до метки деионизированной водой и тщательно перемешивают.

Массовая концентрация в растворе C₁ составляет: для гентамицина - 4 мкг/см³, канамицина - 8 мкг/см³, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 20 мкг/см³, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 40 мкг/см³, апрамицина - 80 мкг/см³.

Срок годности раствора при температуре от минус 20 °C до минус 40 °C - не более 1 мес.

Перед применением раствор выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.3 Приготовление матричных градуировочных растворов G₁ - G₅ аминогликозидов

6.3.3.1 Приготовление матричного градуировочного раствора G₁

Для приготовления раствора G₁ в полипропиленовую пробирку приливают 0,005 см³ раствора C₁ к остатку после концентрирования чистой пробы, полученной и проанализированной ранее, в соответствии с требованиями раздела 7, доводят объем до 1 см³ с помощью раствора для перерастворения (6.2.6), дегазируют на ультразвуковой бане в течение 15 мин и перемешивают в шейкере в течение 5 мин. Переливают экстракт в микроцентрифужную полипропиленовую пробирку и центрифугируют при 15000 об/мин в течение 5 мин при температуре 4 °C.

Массовая концентрация каждого аминогликозида в растворе G₁ составляет: для гентамицина - 10 мкг/кг, канамицина - 20 мкг/кг, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 50 мкг/кг, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 100 мкг/кг, апрамицина - 200 мкг/кг.

6.3.3.2 Приготовление матричных градуировочных растворов G₂ - G₅

Растворы G₂ - G₅ готовят как раствор G₁, при этом для приготовления раствора:

- G₂ приливают 0,01 см³ раствора C₁;

- G₃ приливают 0,02 см³ раствора C₁;

- G₄ приливают 0,03 см³ раствора C₁;

- G₅ приливают 0,04 см³ раствора C₁.

Массовая концентрация каждого аминогликозида в растворе G₂ составляет: для гентамицина - 20 мкг/кг, канамицина - 40 мкг/кг, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 100 мкг/кг, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 200 мкг/кг, апрамицина - 400 мкг/кг.

Массовая концентрация каждого аминогликозида в растворе G₃ составляет: для гентамицина - 40 мкг/кг, канамицина - 80 мкг/кг, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 200 мкг/кг, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 400 мкг/кг, апрамицина - 800 мкг/кг.

Массовая концентрация каждого аминогликозида в растворе G₄ составляет: для гентамицина - 60 мкг/кг, канамицина - 120 мкг/кг, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 300 мкг/кг, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 600 мкг/кг, апрамицина - 1200 мкг/кг.

Массовая концентрация каждого аминогликозида в растворе G₅ составляет: для гентамицина - 80 мкг/кг, канамицина - 160 мкг/кг, амикацина, гигромицина и спектиномицина - 400 мкг/кг, дигидрострептомицина, неомицина, стрептомицина и паромомицина - 800 мкг/кг, апрамицина - 1600 мкг/кг.

Срок годности растворов в холодильнике при температуре от 2 °C до 4 °C - не более суток.