ГОСТ 32712-2014. Межгосударственный стандарт. Продукция соковая. Определение фумаровой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

7. Проведение определений

 

7.1 Условия хроматографических измерений

Измерения проводят при следующих рекомендуемых параметрах:

- температура термостата колонки, °C - 40 +/- 5;

- объем вводимой пробы, мм³ - 20;

- элюент - раствор серной кислоты по 6.3;

- режим элюирования - изократический;

- скорость подачи потока элюента, см³/мин - 0,6.

Примечание - Условия проведения измерений подбирают в зависимости от типа применяемого хроматографа и хроматографической колонки в соответствии с рекомендациями изготовителя.

 

7.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в соответствии с руководством пользователя программным обеспечением хроматографа.

7.2.1 Проводят измерения градуировочных растворов, приготовленных по 6.4.2, в порядке возрастания их концентраций.

Каждый градуировочный раствор измеряют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 (пункт 3.14) и ГОСТ ИСО 5725-2.

7.2.2 Регистрируют на хроматограммах время удерживания и площадь пика фумаровой кислоты и строят градуировочный график - зависимость площади пика S_i, е.о.п·с, от массовой концентрации фумаровой кислоты в градуировочном растворе C_гр,i, мг/дм³, в виде уравнения прямой

 

C_гр = k_грS_i, (1)

 

где k_гр - градуировочный коэффициент (коэффициент отклика), мг/дм³·(е.о.п.·с)^-1, вычисляемый по результатам измерений градуировочных растворов с помощью программного обеспечения хроматографа или вручную по методу наименьших квадратов, полагая свободный член в уравнении регрессии равным нулю, по формуле

 

(2)

 

где S_i - площадь пика фумаровой кислоты при измерении i-го градуировочного раствора, е.о.п.·с;

C_гр,i - массовая концентрация фумаровой кислоты в i-ом градуировочном растворе, мг/дм³;

i - индекс переменой;

m - количество пар точек.

Градуировочную характеристику, вычисленную методом наименьших квадратов, считают линейной и приемлемой, если значение квадрата коэффициента корреляции составляет не менее 0,990.

Градуировочную характеристику строят заново в случае замены оборудования, колонок, партий реактивов, условий хроматографического определения или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита, но не реже одного раза в неделю.

7.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят ежедневно перед началом работы. В качестве контрольного образца используют раствор фумаровой кислоты в подвижной фазе массовой концентрацией 5,0 мг/дм³, приготовленный в соответствии с 6.4.2. Проводят два параллельных измерения контрольного образца и идентифицируют пик фумаровой кислоты по времени удерживания. По результатам каждого измерения вычисляют массовую концентрацию фумаровой кислоты в контрольном образце по формуле (1).

Проверяют повторяемость значений массовой концентрации фумаровой кислоты при измерении контрольного образца по формуле

 

(3)

 

где C_k,1 и C_k,2 - массовые концентрации фумаровой кислоты в контрольном образце, полученные в первом и втором измерении, мг/дм³;

- среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений C_k,1 и C_k,2, мг/дм³.

Градуировочная зависимость признается стабильной, если выполняется условие

 

(4)

 

где C - фактическая массовая концентрация фумаровой кислоты в контрольном образце, мг/дм³.

Если условие (4) не выполняется, то процедуру контроля повторяют и при получении неудовлетворительного результата контроля градуировку хроматографа проводят заново.

7.5 Измерение проб

7.5.1 В инжектор хроматографа микрошприцем вводят 20 мм³ пробы, подготовленной по разделу 4, и проводят измерения два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ ИСО 5725-2.

Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пика фумаровой кислоты, соответствующее времени удерживания, найденного при измерении градуировочных растворов по 7.2.1, и вычисляют среднее значение площади пиков.

7.5.2 Массовая концентрация фумаровой кислоты в пробе должна находиться в диапазоне градуировочной характеристики.

Если массовая доля фумаровой кислоты в пробе настолько максимальна, что высота соответствующего пика выходит за верхний диапазон градуировочной характеристики, то пробу разбавляют в мерной колбе подходящей вместимости, и измерение повторяют.