ГОСТ Р 55987-2014. Национальный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикормовое сырье. Метод определения переваримости муки из гидролизованного пера in vitro

3.5. Проведение анализа

3.5.1. В высушенной по 3.4.6.3 пробе определяют массовую долю азота по ГОСТ Р 51417.

3.5.2. Инкубация пробы

В коническую колбу вместимостью 250 см³ помещают анализируемую пробу массой 0,5 г высушенной пробы по 3.4.6.3, взвешенной с записью результата взвешивания в граммах до четвертого десятичного знака. Затем осторожно, не допуская разбрызгивания на стенки колбы, вливают в колбу с помощью мерного цилиндра 150 см³ свежеприготовленного раствора пепсина по 3.4.3, предварительно подогретого на водяной бане до 42 °C - 45 °C, и закрывают колбу стеклянной пробкой. Осторожными круговыми движениями колбы перемешивают ее содержимое, добиваясь полного смачивания пробы раствором пепсина. Колбу с полученной суспензией устанавливают в устройство для перемешивания водяной бани или термостата, предварительно нагретых до (45 +/- 1) °C, и выдерживают при этой температуре в течение 16 ч с периодическим перемешиванием содержимого колб с частотой не более 30 - 50 об/мин каждые 2 ч в течение 5 мин. Частоту и амплитуду колебаний колб подбирают так, чтобы в процессе инкубации не происходило попадания частиц пробы на стенки колбы, расположенные над уровнем жидкости.

3.5.3. Фильтрование

После окончания инкубации содержимое колбы количественно переносят в центрифужный стакан вместимостью 250 см³, смывая остатки с колбы небольшими порциями дистиллированной воды и добавляя смывы в центрифужный стакан. Стакан устанавливают в центрифугу, уравновешивают и центрифугируют в течение (30 +/- 1) мин с частотой вращения ротора, обеспечивающей фактор разделения не менее 500. По окончании центрифугирования фильтруют через предварительно высушенный и взвешенный бумажный фильтр с помощью колбы Бунзена и воронки Бюхнера сначала надосадочную жидкость, а затем осадок, смывая его небольшими порциями дистиллированной воды. Перед фильтрованием бумажный фильтр смачивают дистиллированной водой. При необходимости фильтрование проводят с разрежением для ускорения процесса. После окончания фильтрования остаток на фильтре промывают тремя порциями ацетона по 15 см³.

3.5.4. Определение массы негидролизованного остатка пробы (переваримость муки)

Фильтр с негидролизованным остатком пробы помещают в чашку Петри или, осторожно свернув, в стеклянный стакан и высушивают в сушильном шкафу при температуре (105 +/- 2) °C до постоянной массы. Через 30 мин выдерживания в сушильном шкафу чашку Петри или стакан с фильтром и остатком пробы охлаждают в эксикаторе и взвешивают фильтры с остатками пробы. Последующие охлаждения и взвешивания повторяют через 15 - 20 мин до тех пор, пока разность масс между двумя последовательными взвешиваниями не будет меньше 0,001 г. Высушенный фильтр с остатком пробы взвешивают с записью результата взвешивания в граммах до четвертого десятичного знака. Массу не гидролизованного пепсином остатка пробы M₁, г, вычисляют по формуле

 

M₁ = M - M₀, (1)

 

где M - масса высушенного фильтра с остатком пробы, г;

M₀ - масса высушенного фильтра по 3.4.4, г.

3.5.5. Определение массы азота в негидролизованном остатке пробы (переваримость протеина муки)

Определение массы азота проводят в негидролизованном остатке пробы вместе с фильтром методом Кьельдаля по ГОСТ Р 51417 (N), одновременно определяют массу азота в фильтре без пробы (N₀). Массу азота N₁, г, в негидролизованной пробе вычисляют по формуле

 

N₁ = N - N₀, (2)

 

где N - масса азота в остатке пробы вместе с фильтром, г;

N₀ - масса азота в фильтре, г.